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血清中皮质甾类药物检测的快速萃取方法 (CommaSep® SLE)

2019-08-02 14:27:40
逗点生物
163
最后编辑:逗点生物 于 2019-08-02 14:31:45

SLE 液液萃取柱

本应用为将 CommaSep® SLE 1 mL(Cat.No.COSLE1CC)的液液萃取柱,应用于血清中皮质甾类药 ( 氢化可的松和曲安西龙 ) 的快速提取和定量,流程如图 1 所示。

一、样品提取

将血清样品纯水稀释并混匀,使样品最终的pH接近8.0。取一部分空白稀释血清备用;剩下的空白稀释血清加入一定体积的氢化可的松和曲安西龙储备液,配制成浓度为 1.5 mg/L 的氢化可的松和曲安西龙加标血清。
二、SLE 柱净化
1) 上样: 向 SLE 柱中加入 1 mL 预处理的样品,加负压启动流速 (5-15 秒 ),然后让样品吸附于填料中约 5 分钟。
2) 洗脱: 向柱中加入 4 mL 乙酸乙酯,使溶剂通过重力流出并收集洗脱液,然后再向柱中加入 4 mL的乙酸乙酯,收集洗脱液。在收集结束后加适当的正力或负压 (-15" Hg)2 分钟并收集最终洗脱出的溶剂。
3) 重新溶解: 将上述收集的洗脱液于35 ℃低真空下浓缩,再用缓氮气流去除乙酸乙酯溶液,使其浓缩至近干。取 1 mL(60:40, v/v) 的水 / 甲醇定容,供 HPLC 分析。

三、仪器条件

设备:Waters Alliance 2695
色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器:Waters 2487 紫外检测器
检测波长:245 nm
流动相:A:0.1 % 甲酸水溶液 B:乙腈
洗脱方式:梯度洗脱
表 1 梯度洗脱条件


柱温:室温
流速:1 mL/min
进样体积:20 µL

四、实验结果

表 2 氢化可的松和曲安西龙的回收率