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多种规格和应用可选

合成柱OEM
0
Hotstart Taq DNA聚合酶
Hotstart Taq DNA聚合酶
Hotstart Taq DNA聚合酶

Hotstart Taq DNA聚合酶

供应商货号:P1041,P1042,P1043,P1044

详情
Hot start Taq DNA聚合酶是一种创新型的化学修饰热启动酶,该酶在室温下活性被完全封闭,依赖温度激活酶活性,可有效减少非特异性扩增,具有非常高的特异性。扩增片段长度可达5 kb(简单模板)。延伸速率为2min/kb(70-75℃,简单模板可达20s/kb)。该酶具有5'→3'聚合酶活性,无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA末端。Hotstart Taq DNA聚合酶采用先进的化学修饰技术生产,动物源性DNA污染为零,稳定性更强,具有抗体法热启动酶不可比拟的优势。同时,预变性时间缩短至3分钟,工作效率比大多数化学修饰法热启动酶更高,是一款非常新颖、实用的产品。

产品组成

Component

P1041

250U

P1042

1,000U

P1043

3,000U

P1044

18,000U
Hot start Taq DNA聚合酶(5U/μl)
50 μl
200 μl
200 μl × 3
100 μl× 36
10× Hot start Buffer(Mg2+ Plus)[1]
1.25 ml
1.25 ml× 2
1.25 ml × 6
1.25 ml × 36
6× Loading Buffer[2]
1 ml
1 ml
1 ml
-
[1] 10× Hot start Buffer分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装,可方便选择。如无特别说明提供Mg2+ Plus缓冲液。Mg2+ Free的10× Hot start Buffer提供25 mM MgCl2 本产品不含dNTPs,如有需要请单独购买

活性定义

个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。 应用举例
1. 配制反应体系
请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

Ordinal
Component

Volume(50 μl reaction volume)

Final   concentration(50 μl reaction volume)

1 10× Hotstart Buffer(Mg2+Plus)
5 μl

2 dNTPs(2.5mM)
4 μl
0.4 mM
3 upstream primer (10 μM)[1]
2 μl
0.4 μM
4 downstream primer (10 μM)[1]
2 μl
0.4 μM
5 Optimus™ Hotstart Taq   DNA聚合酶(5U/μl)[2]
0.5 μl-1 μl
2.5U-5U
6 template DNA[3]
1-4 μl
<1μg
7 超纯水
To 50 μl
-
optional
MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[5]
Variable
-
[1] 引物终浓度建议范围:0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度,效率低时可提高浓度。
[2] 根据目的片段扩增的难易程度调整DNA聚合酶的用量。
[3] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建议用量如下表(50 μl反应体系)
Template
Dosage
人类基因组DNA
0.1μg-1μg
λDNA
0.5ng-5ng
大肠杆菌基因组DNA
10ng-100ng
质粒DNA
0.1ng-10ng

2. 设定反应程序进行PCR反应

Stage
Temperature
Time
Number of Cycles
Initial Denaturation
94℃
3 min
1
Denaturation
94℃
30 sec
25-35
Annealing
55-68℃[1]
30 sec
Extension
72℃
Variable[2]
Final Extension
72℃
5-10 min
1
[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。
[2] 延伸时间按2min/kb来设最佳(简单模板可达20s/kb)。
3. 分析结果
将产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要,可进行割胶回收。

无产物或产物量少的改进措施有:1调整退火温度;2减少抑制剂的影响,如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分,需要高倍稀释(1: 10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脱,提高模板DNA的纯度;4使用PCR添加剂,如PCR Enhancer、MgCl2等可提高产量。

操作注意事项

1 本产品采用改进的化学修饰技术,依赖温度激活DNA聚合酶,能有效抑制非特异性结合,可在室温下配置反应体系。

2 Hot start Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间;上下游引物3’末端避免互补,避免出现3个以上重复的G或C,或出现发夹结构,否则会产生非特异性扩增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量尽量接近;Tm值控制在55-65 ℃之间,且上下游引物Tm值尽量接近,额外附加序列(酶切位点、修饰等)是非模板匹配序列,不参与Tm值计算。

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