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血清中脂溶性维生素含量的分析(CommaSep® SLE)

2019-08-02 09:16:53
逗点生物
133
最后编辑:逗点生物 于 2019-08-02 14:28:13

一、设备和材料

1)CommaVac® CommaMix 多功能混匀仪
2)CommaSep® SLE 96 孔固相支持液液萃取板
3)CommaVac® 96 孔氮吹仪
4)CommaVac® 96 孔正压提取装置

二、仪器条件

仪器:FH-6000MD UPLC-MS/MS
色谱柱:Waters Xbridge C18 (2.1mm×50 mm, 3.5 μm)
柱温:40 ℃
进样量:5 μL
流动相:A:Buffer A B:Buffer B
洗脱方式:梯度洗脱
表 1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压:3500 V
鞘气压力:35 arb
辅气压力:2 arb
离子传输管:350 ℃
辅气温度:340 ℃
采集方式:多反应监测
表 2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、实验步骤

1、样品提取
取 100 μL 血清置 1.5 mL 离心管中,加入 100 μL 内标萃取液,2500 rpm 涡旋 1 min 混合均匀,7000 rpm 瞬离 10 s,再加入 100 μL 缓冲液,2500 rpm 涡旋 1 min混合均匀后 7000 rpm 瞬离 10 s。
2、样品净化
1) 上样:将预混合好的样液全部上样到 400 μL/mL 的SLE 板上,待全部样品浸润后静置 5 min。
2) 洗脱:用 2.10 mL 洗脱液分三次进行洗脱,最后一步洗脱结束,将SLE板与收集板整体放到正压装置上,开启压力至 10-15 psi,约 5 s,完全收集洗脱液。
3) 氮吹复溶:将洗脱液 40 ℃下用氮吹仪氮吹至干,使用 50 μL 复溶液复溶,2500 rpm 涡旋 3 min,2000rpm、4 ℃离心 1 min,上机进样检测。

四、实验结果

                              表 3 板内稳定性结果                                                                      表 4 加标回收率结果
 


                                                                     图 1 脂溶性维生素检测的色谱图

由以上数据表明:CommaSep® SLE 96 孔固相支持液液萃取板对脂溶性维生素的检测回收率在 70-110% 之间,且稳定性好,满足测试要求。

五、订购信息