鱼肉中孔雀石绿检测的固相萃取方法（Copure® ALA/PRS）
- 2019-08-01 11:30:54
- 逗点生物
一、样品提取
准确称取鱼肉样品 5.0 g 于 50 mL 离心管 1 中，加入 1.5mL 20 % 的盐酸羟胺，2.5 mL 1.0 mol/L 的对甲苯磺酸，5.0 mL 乙酸钠 - 对甲苯磺酸缓冲液（4.95 g 无水乙酸钠及0.95 g 对甲苯磺酸，用乙酸调 pH=4.5，定容至 1 L），匀浆机均质 30 s（10000 r/min）。加入 10 mL 乙腈，剧烈振摇 30 s。加入 5 g 酸性氧化铝，震荡 30 s。离心机离心10 min（3000 r/min）,取上清液转移至预先加好10 mL水、2 mL 二甘醇的离心管 2 中。加入 10 mL 乙腈至离心管 1 中，重复上述提取一次，合并乙腈层。离心管 2 中加入 15 mL二氯甲烷，振荡 10 s，离心 10 min（3000 r/min），取二氯甲烷层于梨形瓶中。继续用 5 mL 乙腈、10 mL 二氯甲烷重复上述提取一次，合并两次提取的二氯甲烷层。将提取液45℃旋转蒸发至1 mL，再用2.5 mL乙腈溶解，待净化。二、SPE 柱净化
实验材料： Copure® ALA，1000 mg/3 mL； Copure® PRS，500 mg/3 mL
(1) 活化：按照 ALA 柱在上，PRS 柱在下顺序将两柱串联，固相萃取柱使用前使用 5 mL 乙腈活化。(2) 上样和洗脱：将梨形瓶中的待净化液转移至 ALA 柱中净化，梨形瓶使用 5 mL 的乙腈分两次洗，弃去 ALA 柱，吹 PRS 柱至近干，在不抽真空的情况下，加入 5 mL 乙腈/0.1 mol/L 乙酸铵溶液 (25:75, v/v, pH=10)，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液45 ℃氮吹至近干，用1 mL乙腈定容，过 0.45 μm 滤膜，待上机测试。
三、仪器条件
设 备：Waters Alliance 2695色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器 ：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：618 nm
流动相：A：乙腈 B：0.05 mol/L 乙酸铵缓冲溶液
洗脱方式：梯度洗脱 见表 1
表 1 梯度洗脱条件
流速：1.2 mL/min
进样体积：50 μL
四、实验结果
表 2 0.1 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果
图 1 添加水平为 0.1 mg/kg 鱼肉中孔雀石绿检测色谱图
五、订购信息
