大米中黄曲霉毒素 B1 含量的免疫亲和柱法 （Copure® 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱 )
- 2019-08-13 11:12:01
- 逗点生物
一、样品提取
称取 5.00 g（精确到 0.01 g）粉碎大米到 50 mL 离心管，加入 20 mL 70 % 甲醇水溶液，涡旋混匀，振荡 10 min，4000 r/min 下离心 5 min，取上清液 4 mL 于另一 50 mL 离心管，加水 21 mL，混匀待净化。二、免疫亲和柱净化
实验材料：Copure® 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱，3 mL
(1) 上样：将 20 mL 上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液以 1-2 滴 / 秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。(2) 淋洗和洗脱：用 20 mL 水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入 2×2 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3秒/滴；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。
三、衍生化反应
(1) 衍生：加 100 μL 三氟乙酸和 200 μL 正己烷于待衍生样品液中，于 40 ℃水浴避光振荡 15 min。(2) 重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加 1 mL 10 % 乙腈水溶液溶解，0.22 μm 滤膜过滤，供 HPLC 分析。
四、仪器条件
设备：Waters Alliance 2695色谱柱：Inertsustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2475 荧光检测器
检测波长：激发波长：360 nm 发射波长：440 nm
流动相：A：乙腈 B：水
洗脱方式：等度洗脱，A：B=25：75
流速：0.6 mL/min
进样体积：20 μL
五、实验结果
表 1 0.5 μg/kg 大米中黄曲霉毒素 B1 的添加回收结果
图 1 添加水平为 0.5 μg/kg 大米中黄曲霉毒素 B1 检测的液相色谱图
六、订购信息
