猫粮中维生素 B12 的液相测定
- 2022-03-28 11:50:13
- 逗点生物
一、样品提取
准确称取混合均匀的猫粮样品 2.0 g( 精确至 0.01 g)于 50 mL 离心管中，加入 20 mL 去离子水溶液，涡旋 10
min，超声 15 min，离心 10 min，转速 8000 r/min，移取
4 mL 上清液，备用。
二、样品净化
准确移取上清液 4 mL 加入免疫亲和柱中，当液面下降到亲和柱管体（未完全流干），用 10 mL 水淋洗，弃去全部
流出液，抽干小柱。用 2 mL 甲醇进行洗脱，关阀门静置
2~3min 再收集流出液。整个过程控制流速不要超过 1mL/
min。在收集的洗脱液中加入 50 µL 的 0.1% 甲酸水，之后
放置于 50~60℃氮吹至近干，加 1 mL 的 0.1% 甲酸水涡旋
混匀，过 0.22 µm 尼龙滤膜供上机测试。
三、仪器条件
仪器：UltiMate 3000（Thermofisher Scientific）色谱柱：Copure® C18 (4.6 mm×250 mm，5 µm)
流动相：0.03 moL 磷酸盐缓冲液（pH=3.5）：
乙腈 = 85:15
检测波长：361 nm
流速：1.0 mL/min
柱温：30℃
进样量：20 µL
四、实验结果
表 1 猫粮中维生素 B12 加标回收实验结果
注意事项：
维生素 B12 免疫亲和柱的柱容量 ( 最大吸附维生素 B12) 为
1000ng，当样品中维生素 B12 超过测定范围时，请适当减
小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。
操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，
不能太快，否则会使检测结果偏低。
维生素 B12 免疫亲和柱使用前需要恢复到室温，室温放置
至少 30 min。
订购信息
| 货号 | 描述 |
包装 |
|---|---|---|
| COAFB12103 | Copure® 免疫亲和净化柱（维生素 B12 亲和净化柱），3mL |
25支/盒 |
| CS4625ODS | Copure ® ODS色谱柱，4.6mm×250mm，5µm |
1根/盒 |
| SDC-3000 |
多管涡旋混匀仪 |
1台/箱 |
| SF130-22-NL |
尼龙针式过滤器，直径 13 mm，孔径 0.22 µm，有机系 |
100个/盒 |
| SC2-1 |
2mL蓝色聚丙烯盖，白色 PTFE/ 红色硅胶垫，9-425 |
100个/盒 |
| V2-AL |
2mL螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm，9-425 |
100个/盒 |
