人体尿液中儿茶酚胺及其代谢物的检测
- 2022-07-12 16:35:43
- 逗点生物
一、引言
儿茶酚胺(CAs)是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚和胺基通过L- 络氨酸在交感神经、肾上腺髓质和亲铬细胞位置的酶化步骤结合。通常,儿茶酚胺是指多巴胺
(DA)、去甲肾上腺素(NE)和肾上腺素(E),而去甲变肾上腺素(NMN,又名甲氧基去甲肾上腺素)、变肾上腺素
(MN,又名甲氧基肾上腺素)和3- 甲氧基酪胺(3-MT)分别是NE、E 和DA 的代谢产物。
尿液中CAs 及其代谢物水平与人体多种生理、病理现象有密切关系,临床研究发现CAs 可以用于临床辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病, 其代谢物MN 以及NMN 对诊断嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤有极高的敏感度与准确度,是内分泌指南推荐的首选检测指 标。
本方案建立了尿液中CAs 及其代谢物测定方法,并对其进行了方法学验证。经验证方法定量限为5 ng/mL,低中高三水平加标回收率介于90%-110% 之间,低中高质控 CV 值小于8%。
图1 儿茶酚胺及其代谢物分子结构
表1 各组分质谱采集离子参数
Compound |
Precursor (m/z) |
Product (m/z) |
Collision Energy (V) |
RF Lens (V) |
NE |
152.088 |
77.179 |
28.35 |
107 |
107.125 |
15.8 |
|||
135 |
11.29 |
|||
DA |
154.088 |
91.155 |
21.26 |
70 |
119.083 |
16.75 |
|||
137 |
10.23 |
|||
NE-D6 |
158.125 |
111.1 |
17.01 |
112 |
112.1 |
17.2 |
|||
140.071 |
13.49 |
|||
DA-D4 |
158.138 |
95.137 |
22.97 |
71 |
122.113 |
16.82 |
|||
141.071 |
11.59 |
|||
NMN |
166.088 |
121.054 |
15.35 |
106 |
134.071 |
15.31 |
|||
3-MT |
168.088 |
91.155 |
22.02 |
68 |
119.083 |
16.82 |
|||
151 |
10.23 |
|||
NMN-D3 |
169.1 |
109.095 |
18.53 |
108 |
123.083 |
15.91 |
|||
137.071 |
15.42 |
|||
3-MT-D4 |
172.125 |
95.137 |
23.19 |
71 |
123.042 |
17.66 |
|||
155.083 |
11.06 |
|||
MN |
180.088 |
120.113 |
16.9 |
129 |
121.054 |
17.05 |
|||
148.012 |
16.75 |
|||
165 |
15.04 |
|||
MN-D3 |
183.088 |
123.083 |
17.66 |
|
151.054 |
16.86 |
|||
168 |
15.31 |
|||
E |
184.088 |
107.1 |
19.14 |
68 |
151 |
18.53 |
|||
166 |
10.23 |
|||
E-D3 |
187.088 |
169.012 |
11.1 |
70 |
二、实验结果
2.1 色谱图
儿茶酚胺及其代谢物以及其同位素内标提取离子色谱图分别见图二

2.1 校正曲线
E、NE、DA、MN、NMN、3-MT 基质校正曲线见图3,线性范围2-200 ng/mL,线性相关性R2 >0.998。

2.1 回收率及稳定性
表2 尿液中儿茶酚胺及其代谢物加标回收率结果
图3 E、NE、DA、MN、NMN、3-MT 校正曲线
加标浓度(ng/mL) |
回收率(%,n=4) |
|||||
E |
NE |
DA |
MN |
NMN |
3-MT |
|
10 |
93.62% |
107.53% |
109.06% |
103.48% |
102.92% |
92.54% |
50 |
90.45% |
95.81% |
90.65% |
93.12% |
95.14% |
90.19% |
200 |
104.97% |
97.08% |
98.46% |
101.77% |
103.13% |
102.47% |
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从表2 可以看出,不用加标浓度下,6 种化合物都有较好的回收率。
![]()
表3 尿液中儿茶酚胺及其代谢物日间稳定性结果
水平 |
CV(%,n=20) |
|||||
E |
NE |
DA |
MN |
NMN |
3-MT |
|
低 |
3.21% |
6.87% |
7.67% |
6.70% |
6.21% |
5.26% |
中 |
3.61% |
5.24% |
3.02% |
2.23% |
3.43% |
2.87% |
高 |
4.68% |
6.17% |
5.13% |
4.12% |
6.51% |
5.01% |
该部分实验从不同批次萃取板中抽取不同孔位进行测试。从目标化合物的结果可以看出,该产品稳定性良好。
三、总结
本方法通过HPLC-MS/MS 对尿液中儿茶酚胺及其代谢物进行联合测定,对方法回收率、定量限进行实验,并为考察方法稳定性进行了批间、日内、日间稳定性等方面的验证,方法稳定可靠,灵敏度高,特异性强,满足检测要求。





