一、设备和材料

1）Copure® MS HLB 96 孔板2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔正压提取装置4）biocomma® 96 孔氮吹仪5）biocomma® 热封膜仪

二、仪器条件

仪器：Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 µm) 柱温：40℃

进样量：5 µL

流动相：A：水（含0.1%FA） B：甲醇（含0.1%FA） 洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：15 arb

辅气压力：1 arb 离子传输管：360℃ 辅气温度：380℃ 离子化方式：ESI+

采集方式：多反应监测

表2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、实验步骤

3.1 样本预处理

移取100 µL 血浆样本于1.5 mL 的离心管中，再加入25 µL 内标，1800 rpm 涡旋1 min。然后加入200 µL 甲醇溶液，

1800 rpm 涡旋1 min。最后加入500 µL 水，1800 rpm 涡旋1 min。将样品在12000 rpm 离心5 min。

3.1 样品净化

1) HLB 板活化：分别加入200 µL 甲醇和200 µL 水到MS HLB 96 孔板中。

2) 上样：取600 µL 预处理上清液至 96 孔板中，低压力正压条件下使样液缓慢通过板孔。

3) 淋洗：依次用200 µL 含0.1% 氨水的35% 甲醇溶液和

200 µL 含0.1% 甲酸的35% 甲醇溶液对板孔进行淋洗，然后将HLB 96 孔板在正压的氮气条件下干燥30S，以尽可能多的去除柱床中的溶剂。

4）洗脱：使用200 µL 乙腈- 甲醇（85：15）溶液，将分

析物由MS HLB 96 孔板中洗脱至96 孔收集板中。

3.2 氮吹复溶

将收集板于氮气条件下进行吹干处理，吹干后先用30 µL 乙腈- 甲醇（85：15）溶液 进行复溶，涡旋混匀后再加入70 µL 水，涡旋混匀。

3.3 上机检测

将复溶液注入LC-MS/MS 系统中进行检测。

备注：① 沉淀剂中包含内标工作液，浓度和体积可根据实

         验室的方法进行适当调整。

  ② 标准曲线的前处理方法与样本相同。

四、实验结果

4.1 回收率结果

表3 血浆中4 种类固醇激素加标回收率结果

从表3 可以看出，不同加标浓度下，4 种目标化合物都有较好的回收率。

表4 稳定性对比结果

该部分实验从不同的生产批次中抽取MS HLB 96 孔板，对不同的孔位进行测试。从目标化合物的结果可以看出，该产品的稳定性良好。

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