血浆中同型半胱氨酸含量的分析 (Copure® PPT)
- 2022-07-12 16:37:35
- 逗点生物
一、设备和材料
1）Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔正压提取装置4）biocomma® 热封膜仪
二、仪器条件
仪器：Thermo Scientific TSQ Endura
色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 µm) 柱温：40℃
进样量：5 µL
流动相：A：水（含 0.1%FA）
B：甲醇（含 0.1%FA） 洗脱方式：梯度洗脱
表1 流动相梯度洗脱条件
时间（min） |
流速（mL/min） |
%B |
Curve |
0 |
0.3 |
5 |
5 |
0.5 |
0.3 |
5 |
5 |
4.0 |
0.3 |
30 |
5 |
4.5 |
0.3 |
30 |
5 |
4.6 |
0.3 |
5 |
5 |
6.0 |
0.3 |
5 |
5 |
电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：35 arb 辅气压力：2 arb
离子传输管：350℃ 辅气温度：320℃ 离子化方式：ESI+
采集方式：多反应监测
表2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数
Compound |
Precursor (m/z) |
Product (m/z) |
Collision Energy (V) |
RF Lens (V) |
同型半胱氨酸 |
136.1 |
56.3 |
17.32 |
51 |
90.2* |
10.23 |
三、实验步骤
取 50 µL 血浆于 PPT 的孔中，加入 0.5mol/L DTT。用热封膜仪封膜后，1500 rpm 涡旋 2 min，室温放置 10min。再移取300 µL 甲醇于 PPT 的孔中，用热封膜仪封膜后，1500 rpm 涡旋 2 min。将 PPT 与接收板置于正压提取装置中， 调节压力，使滤液的流速保持 1-2 秒 / 滴，收集滤液，上
LC-MS/MS 系统中进行检测。
备注：标准曲线的前处理方法与样本相同。
四、实验结果
4.1 检测色谱图
4.1 回收率结果
表3 血浆中同型半胱氨酸加标回收率及稳定性结果
加标浓度（ppb） |
回收率（%，n=4） |
CV（%，n=4） |
125 |
102.7 |
8.37 |
1250 |
108.0 |
3.07 |
从表3 可以看出，不同加标浓度下，同型半胱氨酸回收率和稳定性均良好。
订购信息
|
描述 |
包装 |
MPPT9601 |
Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板，1 mL/well |
1 块/ 盒 |
MPPT9602 |
Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀过滤板，2 mL/well |
1 块/ 盒 |
BCM2500 |
biocomma® 多功能混匀仪 |
1 台/ 箱 |
BCY9601 |
biocomma® 96 孔正压提取装置 |
1 台/ 箱 |
BCS9601 |
biocomma® 热封膜仪 |
1 台/ 箱 |
