一、设备和材料

1）Copure® MS MCX 96 孔板（30mg /2 mL） 2）biocomma® 多功能混匀仪

3）biocomma® 96 孔正压提取装置4）biocomma® 96 孔氮吹仪5）biocomma® 热封膜仪

二、仪器条件

仪器：Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 µm) 柱温：40℃

进样量：5 µL

流动相：A：水（含 0.1%FA）

  B：甲醇（含 0.1%FA） 洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：15 arb

辅气压力：2 arb 离子传输管：380℃ 辅气温度：350℃ 离子化方式：ESI+

采集方式：多反应监测

表2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、样本前处理

3.1 样本预处理

移取200 µL 血清样本于1.5mL 的离心管中，再加入12 µL 内标，再加入适量的含0.1% 甲酸的甲醇，使各样本终体积为1.2mL，2500 rpm 涡旋5min。将样品在室温下放置平衡1h，将样品在4℃下8000r/min 离心5min。

3.2 样品净化

1) MCX 板活化：依次加入1 mL 甲醇和1 mL 水到MS MCX 96 孔板中进行活化。

2) 上样：取900 µL 预处理上清液至96 孔板中，低压力正压条件下使样液缓慢通过板孔。

3) 淋洗：依次用1 mL 2% 甲酸溶液和1 mL 甲醇溶液对板孔进行淋洗，然后将MS MCX 96 孔板在正压的氮气条件下干燥      30S，以尽可能多的去除柱床中的溶剂。 4）洗脱：使用1 mL 5% 氨水甲醇溶液进行洗脱，将分析

物由MS MCX 96 孔板中洗脱至96 孔收集板中。

3.3 氮吹复溶

将收集板于45℃下进行氮吹，吹干后用100 µL 初始流动相进行复溶，涡旋混匀。

3.4 上机检测

将复溶液注入LC-MS/MS 系统中进行检测。

四、实验结果

4.1 回收率结果

表3 血清中甲状腺激素T3、T4 加标回收率结果

从表3 可以看出，不同加标浓度下，目标化合物T3、T4 都有较好的回收率。

表4 稳定性对比结果

从不同的生产批次中抽MCX 板，对不同的孔位进行测试。从目标化合物的结果可以看出，该产品的稳定性良好。

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