一、设备和材料

1）Copure® MS MAX（3 mg/well） 2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔正压提取装置4）biocomma® 96 孔氮吹仪5）biocomma® 热封膜仪

二、仪器条件

仪器：Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：CommaSil® C18 (2.1mm×100 mm, 3 µm) 柱温：35℃

进样量：8 µL

流动相：A：水（含 0.1%FA）

  B：甲醇（含 0.1%FA） 洗脱方式：等度洗脱 

A:B=20:80

电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：15 arb 辅气压力：2 arb

离子传输管：380℃ 辅气温度：350℃ 离子化方式：ESI+

采集方式：多反应监测

表1 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、样本前处理

3.1 样本预处理

移取200 µL 血浆样本于1.5 mL 的离心管中，再加入25 µL 适量浓度的内标，涡旋混匀。接着加入200 µL 0.1 mol/L 硫酸锌的50% 甲醇溶液，涡旋混匀，最后加入 450 µL 0.05%(v/v) 磷酸，再涡旋混匀。将样品在 4℃下8000 r/min 离心5 min。

3.1 样品净化

MAX 板活化：依次加入200 µL 甲醇和200 µL 水到MAX 96 孔板中进行活化；

上样：取625 µL 预处理上清液至96 孔板中，低压力正压条件下使样液缓慢通过板孔；

淋洗：依次用200 µL 0.05% 磷酸、200 µL 0.1% 氨水的10% 甲醇溶液和 200 µL 水对板孔进行淋洗，然后将MAX 96 孔板在正压的氮气条件下干燥30 s，以尽可能多的去除柱床中的溶剂。

洗脱：使用50 µL 70% 甲醇溶液和40 µL 水进行洗脱，将分析物由MAX 96 孔板中洗脱至96 孔收集板中，混匀，上LC-MS/MS 系统进行检测。

四、实验结果

4.1 血浆基质中醛固酮检测色谱图

图1 20 ppb 醛固酮血浆基质加标检测色谱图

4.2 血浆基质中醛固酮回收率检测结果

表2 血浆中醛固酮加标回收率结果

从表3 可以看出，不同加标浓度下，目标化合物醛固酮都有较好的回收率。

4.3 稳定性检测结果

表3 血浆中醛固酮稳定性对比结果

分别对同一板内和不同批间，选取不同的孔位进行稳定性 测试。从目标化合物的结果可以看出，该产品的稳定性良好。

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