一、设备和材料

1）Copure® 96 孔PPT 蛋白沉淀板2）biocomma® 多功能混匀仪3）biocomma® 96 孔氮吹仪4）biocomma® 96 孔正压提取装置5）biocomma® 热封膜仪

二、仪器条件

仪器：Thermo Scientific TSQ Endura

色谱柱：CommaSil® AQ (2.1 mm×100 mm, 1.9 µm) 柱温：30℃

样品温度：10℃ 进样量：2 µL

流动相：A：水（含0.1% FA）         

  B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱

表1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压：3500 V 鞘气压力：35 arb 辅气压力：2 arb

离子传输管：350℃ 辅气温度：340℃

采集方式：多反应监测

表2 化合物的保留时间及离子对参数

注：* 表示定量离子对

三、实验步骤

1、样品提取

将25 µL 血浆和25 µL 50% 甲醇水溶液混合均匀。

2、样品净化

1） 向96 孔PPT 板中加入250 µL 甲醇，再将上述混好的血浆加到96 孔PPT 板中，封膜后在多功能混匀仪上1000 r/min 涡旋4 min 混匀。

2） 使用正压装置，调节压力，控制流速1 滴/ 秒，将 PPT 板上液体压入到96 孔收集板中。

3） 将收集板置于 96 孔氮吹仪上，40℃氮气吹干。

4） 向收集板中各孔中加入500 µL 0.1% 甲酸水溶液，涡旋混匀供上机测试。

四、实验结果

使用空白血浆样品配制7 个不同浓度的校准标曲点，普瑞巴林和替米沙坦的浓度分别为：5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL。所得样品采用上述前处理方法净化并上机检测，基质标准 曲线见表3。另取血浆样品添加不同浓度目标物进行加标回收实验，测定结果见表4。

表3 基质标准曲线

表4 血浆中普瑞巴林和替米沙坦加标回收实验结果（n=3）

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