OA李斯特氏菌显色培养基：用于单核细胞增生李斯特氏菌检测的选择性显色培养基

一、产品基本信息

二、检验原理

OA李斯特氏菌显色培养基由基础营养系统、选择性抑菌系统、显色底物系统和磷脂酶反应系统组成。

基础培养基中的蛋白胨、胰蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、氨基酸、肽类、维生素及微量生长因子；葡萄糖提供碳源和能源；丙酮酸钠有助于受损菌恢复生长；镁盐参与多种酶反应并维持细胞代谢；氯化钠维持适宜渗透压；无水碳酸氢二钠参与缓冲体系；琼脂用于形成固体培养基表面。

培养基中的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃葡萄糖苷是一种显色底物。李斯特氏菌属细菌通常具有β-葡糖苷酶活性，可水解该底物并释放显色基团，使菌落呈蓝绿色或绿色。

增补剂中的L-α-磷脂酰肌醇用于观察磷脂酶活性。单核细胞增生李斯特氏菌具有相关磷脂酶活性时，可在菌落周围形成乳白色不透明晕环。因此，典型单核细胞增生李斯特氏菌在该培养基上表现为蓝绿色菌落，并带有白色晕环；部分非致病性李斯特氏菌如英诺克李斯特氏菌可形成蓝绿色菌落，但通常不形成白色晕环。

萘啶酮酸、头孢他啶、多粘菌素B和环己酰亚胺构成选择性抑菌系统，用于抑制革兰氏阴性菌、部分革兰氏阳性杂菌及霉菌、酵母菌等干扰菌，提高目标菌分离效率。

三、基础培养基配方、用量及作用

四、增补剂配方、用量及作用

五、用途说明

需要注意的是，OA李斯特氏菌显色培养基用于筛查和初步鉴别，不能仅凭菌落颜色和晕环直接作出最终确认。疑似菌落仍应按照标准要求进行后续确认试验。

六、使用方法

称取本品72.05 g，加入930 mL蒸馏水或去离子水中，搅拌加热至完全溶解。基础培养基经121 ℃高压灭菌15 min后，冷却至约50 ℃。

增补剂使用前应充分混匀。若增补剂混匀不足，制备后的平板可能出现少量白色脂肪粒，一般不影响正常使用，但可能影响外观一致性和结果观察。将混匀后的增补剂加入冷却至约50 ℃的基础培养基中，充分混匀后倾注平板。

制备平板时应避免温度过高加入增补剂，以免抗菌成分或磷脂底物受热影响；也应避免培养基温度过低导致凝固不均或增补剂分散不充分。

七、质量控制要求

质控菌株接种后，于36 ℃培养24 h，观察生长情况、菌落颜色、晕环形成情况及选择性抑制效果。

其中，PR用于评价培养基对目标菌的促生长能力；G值用于评价培养基对非目标菌的抑制能力。对于该培养基而言，合格产品应同时满足三个方面：单核细胞增生李斯特氏菌生长良好并形成典型蓝绿色菌落和白色晕环；英诺克李斯特氏菌可形成蓝绿色菌落但无白色晕环；大肠埃希氏菌和粪肠球菌等非目标菌受到明显抑制。

八、结果判读要点

典型单核细胞增生李斯特氏菌在OA李斯特氏菌显色培养基上通常表现为蓝绿色菌落，菌落周围有白色不透明晕环。英诺克李斯特氏菌等部分李斯特氏菌属细菌可因β-葡糖苷酶反应形成蓝绿色菌落，但通常不形成白色晕环。

实际检测中，应重点观察两个特征：第一是菌落是否呈蓝绿色或绿色；第二是菌落周围是否存在白色晕环。只有同时符合典型显色和晕环特征的菌落，才应作为疑似单核细胞增生李斯特氏菌进入后续确认流程。

若出现颜色偏浅、晕环不明显或背景菌生长较多，应检查培养基制备温度、增补剂混匀程度、平板储存条件、培养时间、接种量以及菌株活性等因素。

九、注意事项

本产品不得用于临床检验。

称量干粉培养基时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作，避免吸入粉尘引起呼吸道不适。

干粉培养基使用后应立即旋紧瓶盖，避免吸潮、结块和选择性成分失效。产品应贮存于避光、干燥处。开封后保质期受储存温度、湿度、取用频率和密封状态影响，应结合企业内控要求进行管理。

制备平板时，基础培养基可按要求高压灭菌，但增补剂应在基础培养基冷却至约50 ℃后加入，不应与基础培养基一起高压灭菌。

十、总结

OA李斯特氏菌显色培养基通过“选择性抑菌 + 显色底物 + 磷脂酶反应”实现单核细胞增生李斯特氏菌的分离和初步筛查。李斯特氏菌属细菌可水解显色底物形成蓝绿色或绿色菌落，而具有相关磷脂酶活性的单核细胞增生李斯特氏菌可进一步在菌落周围形成白色晕环。

在食品微生物检验中，该培养基能够提高疑似单核细胞增生李斯特氏菌的筛选效率，但结果仍需结合标准规定的确认试验进行判定。规范制备基础培养基、充分混匀增补剂、控制加入温度并做好质控验证，是保证培养基检测性能稳定的关键。

参考文献：GB 4789.30-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》。