植物油中黄曲霉毒素 B1 检测的免疫亲和柱法 （Copure® 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱）
- 2019-08-13 11:37:47
- 逗点生物
一、样品提取
准确称取植物油试样 5.0 g 试样（精确至 0.01 g）于50 mL 离心管中，加入 20 mL 84 % 乙腈水溶液，涡旋混合 1 min，超声提取 20 min，在 5000 r/min 离心 10min，提取上清液4 mL于另一个离心管中，加入21 mL水，混匀待净化。二、免疫亲和柱净化
实验材料：Copure® 黄曲霉毒素 B1 免疫亲和柱，3 mL
(1) 上样：将 20 mL 上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化液样品液以 1-2 滴 / 秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。(2) 淋洗和洗脱：用 20 mL 水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流出的液体；抽干小柱；加入2 mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为 2-3 滴 / 秒；50 ℃下氮吹至近干，待衍生。
三、衍生化反应
(1) 加入 100 μL 三氟乙酸和 200 μL 正己烷于待衍生样品中，于 40 ℃水浴避光衍生 15 min。(2) 重新溶解：50 ℃下氮吹至近干，加入 1 mL 15 % 乙腈水溶液溶解，0.22 μm 滤膜过滤，供 HPLC 分析。
四、仪器条件
仪器：Waters Alliance 2695色谱柱：InerSustain®-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)
检测器：Waters 2475 荧光检测器
检测波长：激发波长：360 nm 发射波长：440 nm
流动相：A：乙腈 B：水
洗脱方式：梯度洗脱
表 1 流动相梯度洗脱程序
流速：1 mL/min
进样体积：10 μL
五、实验结果
表 2 1.0 μg/kg 植物油中黄曲霉毒素 B1 的添加回收结果
图 1 添加水平为 1.0 μg/kg 植物油中黄曲霉毒素 B1 检测色谱图
六、订购信息
