QuEChERS方法用于禽畜肉、内脏中大环内酯类兽残检测的UPLC-MS/MS分析 (Copure® 兽残专用QuEChERS)
- 2022-08-15 13:18:33
- 逗点生物
QuEChERS方法用于禽畜肉、内脏中大环内酯类兽残检测的UPLC-MS/MS分析(Copure® 兽残专用QuEChERS)
大环内酯类化合物是从链霉菌培养液种分离出来的一类抗生素，由于对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌和支原体都有很强的抗菌活性，被用作预防疾病和促进生长的饲料添加剂，广泛应用于禽畜生产中。本方法以QuEChERS为净化手段，选择鸡肉、猪肉和猪肝为代表，对禽肉、畜肉和动物内脏三种类型的基质做了三个不同水平加标验证，回收率满足70%~106%，RSD＜10%，符合使用要求，可供客户选择。
一、样品提取（Copure® 兽残专用QuEChERS提取管，货号：COQ050051）
准确称取粉碎均匀的肉类样品2 g于干净离心管中，加入2 mL 水，涡旋1 min，加入10 mL 1%乙酸乙腈溶液，涡旋1 min，加入Copure® 兽残专用QuEChERS盐包，涡旋混匀后超声提取10 min，5000 r/min离心2 min，待®净化。
二、样品净化（Copure® 兽残专用QuEChERS净化管，货号：COQ015604）
取6 mL上清液于Copure® 兽残专用QuEChERS净化管，2500 r/min涡旋2 min，8000 r/min离心5 min，取上清液5 mL，氮吹近干后用0.1%甲酸水：甲醇=9:1溶液定容至1 mL，上机。
三、基质标准曲线溶液的制备
选同类型空白肉类样品，按上述前处理方法进行操作，取净化后的上清液加入适量的标液后与样品一同氮吹复溶，配制成上机浓度分别为2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L的标准曲线。
四、仪器条件
（1）色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Commasil® 兽残专用柱 BEH T-C18 (2.1 mm×100 mm，3 μm)
流动相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：0.3 mL/min
柱温：35℃
进样量：10 μL
表1 梯度洗脱程序
时间/min |
A/% |
B/% |
0.00 |
98 |
2 |
0.25 |
98 |
2 |
2.00 |
70 |
30 |
4.00 |
70 |
30 |
4.20 |
30 |
70 |
6.20 |
30 |
70 |
6.50 |
2 |
98 |
7.80 |
2 |
98 |
8.00 |
98 |
2 |
10.00 |
98 |
2 |
（2）质谱条件
离子源：HESI
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：40 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：380 ℃
辅气温度：350 ℃
表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）
序号 |
名称 |
保留时间/min |
母离子 |
子离子 |
1 |
林可霉素 |
2.89 |
407.3 |
126.1*、359.2 |
2 |
替米考星 |
5.44 |
869.7 |
132.1、174.1* |
3 |
克林霉素 |
5.51 |
425.2 |
126.2*、377.2 |
4 |
竹桃霉素 |
5.52 |
688.5 |
158.1、544.4* |
5 |
吉他霉素 |
5.55 |
772.5 |
109.1*、215.1 |
6 |
泰乐菌素 |
5.55 |
916.4 |
145.1、174.2* |
7 |
红霉素 |
5.56 |
734.6 |
158.1、576.4* |
8 |
螺旋霉素 |
5.57 |
843.6 |
142.1、174.1* |
9 |
交沙霉素 |
5.59 |
828.6 |
109.1、174.1* |
五、实验结果
表3 兽残加标回收实验结果
目标物 |
猪肉 |
猪肝 |
鸡肉 |
|||||||||||||||
10.0 μg/kg |
50.0 μg/kg |
100.0 μg/kg |
10.0 μg/kg |
50.0 μg/kg |
100.0 μg/kg |
10.0 μg/kg |
50.0 μg/kg |
100.0 μg/kg |
||||||||||
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
|
林可霉素 |
79.2 |
3.32 |
82.6 |
2.18 |
80.5 |
2.85 |
74.5 |
4.52 |
76.5 |
4.35 |
72.3 |
3.88 |
75.6 |
4.32 |
78.9 |
3.83 |
79.2 |
3.74 |
替米考星 |
82.2 |
2.39 |
100 |
2.15 |
85.3 |
2.33 |
87.9 |
2.97 |
104 |
3.06 |
102 |
3.02 |
79.9 |
3.36 |
103 |
3.20 |
101 |
2.75 |
克林霉素 |
84.8 |
2.12 |
85.4 |
1.93 |
81.3 |
1.79 |
80.3 |
3.11 |
78.6 |
3.15 |
74.8 |
4.32 |
78.5 |
2.92 |
92.4 |
2.26 |
80.2 |
2.37 |
竹桃霉素 |
89.2 |
2.24 |
96.8 |
2.03 |
88.2 |
2.18 |
89.4 |
2.66 |
85.5 |
2.83 |
80.4 |
2.91 |
84.8 |
2.17 |
97.6 |
2.31 |
86.2 |
2.49 |
