甘露醇氯化钠琼脂培养基:金黄色葡萄球菌选择性分离常用培养基

2026-06-18 17:44:54
逗点生物
简介

甘露醇氯化钠琼脂培养基:金黄色葡萄球菌选择性分离常用培养基

产品基本信息

项目 内容
产品名称 甘露醇氯化钠琼脂培养基
英文名称 Mannitol Salt Agar
产品货号 GF1047
产品规格 250 g/瓶
产品用途 用于药品中金黄色葡萄球菌的选择性分离培养
参考方法 药典
保质期 三年

配方组成、用量、作用及用途

成分 用量(g/L) 主要作用 用途说明
胰酪胨 5.0 提供氮源、氨基酸、短肽和生长因子 支持金黄色葡萄球菌及其他耐盐菌生长
动物组织胃蛋白酶水解物 5.0 提供动物源蛋白水解产物、肽类和氮源 与胰酪胨共同构成基础营养体系,提高促生长能力
牛肉浸出粉 1.0 提供维生素、矿物质、氮源及生长促进物质 补充复杂营养,促进菌落形成
D-甘露醇 10.0 可发酵糖类和鉴别底物 金黄色葡萄球菌发酵甘露醇产酸,使菌落及周围培养基变黄
氯化钠 75.0 形成高盐选择性环境 抑制多数不耐盐微生物,使葡萄球菌等耐盐菌获得生长优势
酚红 0.025 pH 指示剂 酸性条件下由红色转为黄色,用于显示甘露醇发酵产酸反应
琼脂 15.0 凝固剂 形成固体平板,便于菌落分离、观察和挑取
最终 pH(25℃) 7.4 ± 0.2 提供适宜培养环境 有利于金黄色葡萄球菌生长及显色反应稳定表现

检验原理

甘露醇氯化钠琼脂的选择性来自高浓度氯化钠。多数非葡萄球菌类微生物在 7.5% 氯化钠条件下生长受到抑制,而葡萄球菌属对高盐环境耐受性较强,因此可在该培养基上生长。

鉴别性来自 D-甘露醇和酚红。典型金黄色葡萄球菌常可发酵 D-甘露醇产生酸性代谢产物,使菌落及其周围培养基由红色转为黄色,形成黄色菌落并伴黄色晕圈。部分凝固酶阴性葡萄球菌通常不发酵甘露醇或发酵较弱,菌落及周围培养基多保持红色或粉红色。

需要注意的是,甘露醇发酵阳性并不等同于金黄色葡萄球菌最终阳性。少数非金黄色葡萄球菌也可能发酵甘露醇,部分金黄色葡萄球菌表现也可能受培养条件影响。因此,MSA 平板结果应作为初筛依据,最终仍需结合菌落形态、革兰染色、触酶试验、凝固酶试验或其他药典规定的确证方法进行判断。

使用方法

称取本品 111.0 g,加入蒸馏水或去离子水 1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,按使用需要分装后,于 121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 45~50℃,倾注平板备用。

由于配方中氯化钠含量较高,配制时应充分搅拌并加热,使干粉完全溶解,避免局部盐分浓度不均。制备好的平板应颜色均匀、表面平整,无污染、干裂、明显析水或异常沉淀。使用前应按实验室规定进行无菌性和性能检查。

典型菌落特征

在甘露醇氯化钠琼脂上,典型金黄色葡萄球菌可形成黄色菌落,并使菌落周围培养基变黄,出现黄色晕圈。非甘露醇发酵的葡萄球菌通常形成红色、粉红色或无明显黄变的菌落。

菌株或菌群 典型表现 判读意义
金黄色葡萄球菌 黄色菌落,周围有黄色晕圈 提示耐盐并发酵甘露醇,为疑似阳性表现
部分凝固酶阴性葡萄球菌 生长但多不形成明显黄色晕圈 可作为非典型或非目标菌进一步区分
大肠埃希氏菌等非耐盐菌 生长受到明显抑制 体现培养基高盐选择性
其他耐盐菌 可能生长,表现因菌种而异 需结合后续确证试验判断

结果判读时应注意培养时间和培养温度。培养过短可能导致黄变不明显,培养过长则可能出现扩散性变色或背景变化,影响判断。因此应按药典或实验室内控条件进行培养和观察。

质量控制

下列质控菌株接种待测试培养基后,于 32.5℃培养 72 h,观察生长和选择性表现。

指标 质控菌株及编号 质控评定标准
生长率 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 PR ≥ 0.7,黄色菌落,有黄色晕圈
选择性 大肠埃希氏菌 CMCC(B)44102 G ≤ 1,生长应受到明显抑制

金黄色葡萄球菌应生长良好,并出现黄色菌落及黄色晕圈,说明培养基具有合格的促生长能力和甘露醇发酵鉴别能力。大肠埃希氏菌应受到明显抑制,说明培养基高盐选择性符合要求。

若金黄色葡萄球菌生长率低或黄变不明显,应检查培养基称量、溶解、灭菌条件、pH、甘露醇和酚红质量、平板储存状态、菌株活性及培养条件。若大肠埃希氏菌生长明显,则可能与氯化钠浓度不足、配制误差、培养基吸潮、平板储存不当或选择性下降有关。

使用注意事项

甘露醇氯化钠琼脂为选择性鉴别培养基,不适合作为普通细菌通用培养基,也不能单独作为金黄色葡萄球菌最终鉴定依据。疑似阳性菌落应按照药典方法进一步进行纯化和确证试验。

干粉培养基使用后应立即密封,置于避光、干燥处保存,避免吸潮、结块或成分变化。由于配方总量较高,称量和溶解时应确保充分混匀,避免因高盐成分分布不均影响选择性和显色结果。

配制后的平板应在验证有效期内使用。若出现污染、干裂、明显析水、颜色异常或 pH 偏差较大,不宜用于正式检验。观察黄色晕圈时应结合对照菌株和培养条件,避免将非特异性变色误判为目标菌阳性。

总体而言,甘露醇氯化钠琼脂培养基通过高浓度氯化钠抑制多数非耐盐菌,并利用 D-甘露醇发酵和酚红变色反应辅助识别金黄色葡萄球菌,是药品中金黄色葡萄球菌选择性分离培养的重要培养基之一。