TCBS琼脂培养基：致病性弧菌选择性分离与鉴别培养基
- 2026-06-22 16:26:37
- 逗点生物
TCBS琼脂培养基：致病性弧菌选择性分离与鉴别培养基
产品信息与用途
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | TCBS琼脂培养基 |
| 英文名称 | TCBS Agar (Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar) |
| 产品货号 | GF1070 |
| 产品规格 | 250 g/瓶 |
| 保质期 | 未开封条件下三年 |
| 主要用途 | 致病性弧菌（霍乱弧菌、副溶血性弧菌）选择性分离与鉴别 |
| 适用标准 | GB 4789.7-2013、SN/T 1022-2010、FDA BAM |
配方组成及作用
使用时称取本品 89.0 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，加热搅拌至完全溶解，不可高压灭菌，冷却至约 50 ℃后倾注平板，凝固备用。最终 pH 为 8.6±0.2（25 ℃）。
| 成分 | 用量 | 主要作用 |
|---|---|---|
| 蛋白胨 | 10.0 g/L | 提供基础氮源、氨基酸及生长因子 |
| 酵母膏粉 | 5.0 g/L | 提供维生素与生长因子，促进弧菌生长 |
| 蔗糖 | 20.0 g/L | 可发酵碳源，用于区分弧菌代谢类型 |
| 氯化钠 | 10.0 g/L | 满足弧菌嗜盐性生长需求 |
| 柠檬酸钠 | 10.0 g/L | 抑制非目标菌并参与选择性体系 |
| 硫代硫酸钠 | 10.0 g/L | 提供硫源，用于H₂S检测体系 |
| 牛胆汁粉 | 5.0 g/L | 抑制革兰氏阳性菌及部分杂菌 |
| 胆酸钠 | 3.0 g/L | 增强对非弧菌革兰氏阳性菌的抑制作用 |
| 柠檬酸铁 | 1.0 g/L | H₂S显色指示体系（黑色沉淀形成基础） |
| 溴麝香草酚蓝 | 0.04 g/L | pH指示剂（酸性变黄） |
| 麝香草酚蓝 | 0.04 g/L | 与BTB协同形成复合pH指示体系 |
| 琼脂 | 15.0 g/L | 凝固剂，形成固体培养基 |
| 最终 pH | 8.6±0.2 | 强碱性选择环境 |
检验原理
TCBS培养基的核心机制是“强选择性抑制 + 蔗糖发酵显色 + H₂S检测三重体系”。
首先，较高pH（约8.6）结合柠檬酸钠、胆盐及牛胆汁成分，对肠道菌及多数革兰氏阳性菌具有明显抑制作用，使弧菌在选择性压力下获得生长优势。其次，蔗糖作为唯一主要可发酵碳源，不同弧菌对其发酵能力不同：霍乱弧菌通常发酵蔗糖产酸，使pH下降，指示剂由蓝绿色转变为黄色菌落；副溶血性弧菌通常不发酵蔗糖，形成绿色或蓝绿色菌落。
同时，硫代硫酸钠在细菌代谢过程中可参与硫还原反应，在柠檬酸铁存在条件下生成黑色硫化铁沉淀，用于H₂S产生检测，从而进一步辅助鉴别部分细菌代谢特征。
因此，TCBS不仅具备选择性分离功能，还具备明显的鉴别功能，是弧菌检测中不可替代的关键培养基。
质量控制
质控菌株接种后于 35～37 ℃培养 24 h，观察生长情况及菌落颜色。
| 质控指标 | 质控菌株及编号 | 质控评定标准 |
|---|---|---|
| 生长率 | 副溶血性弧菌 ATCC 17802 | PR≥0.2，绿色菌落 |
| 选择性 | 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 | G≤1，不生长或极弱生长 |
其中PR表示生长恢复率，用于评价目标菌在强选择性条件下的生长能力；G≤1表示受抑制菌几乎不生长。理想情况下，副溶血性弧菌应形成典型绿色菌落，而非弧菌应被有效抑制。
使用要点与操作说明
TCBS培养基在配制过程中严禁高压灭菌，这是由于部分选择性成分及指示剂对高温敏感，高压灭菌可能破坏选择性体系并改变显色反应。因此应采用加热溶解后冷却倾注法制备平板。
倾注温度应控制在约50 ℃，过高可能导致成分降解或挥发，过低则影响平板均匀性。培养温度通常为 35～37 ℃，培养时间约24 h。
结果判读时应重点关注菌落颜色：黄色菌落通常提示蔗糖发酵阳性（如霍乱弧菌），绿色菌落多见于副溶血性弧菌或非发酵菌株。对于可疑菌落，应结合氧化酶试验及后续生化或分子检测进行确认，避免误判。
贮存与安全注意事项
干粉培养基应密封保存于阴凉、干燥、避光环境中，防止吸潮及成分变质。开封后应尽快使用并保持瓶口密封。
操作过程中应避免粉尘吸入，建议佩戴口罩并在通风良好环境中操作。本产品仅用于实验室微生物检测，不得用于临床诊断或人体用途。
实验结束后的所有培养物及污染材料应按生物安全规范处理，一般采用 121 ℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃处置。
参考文献
GB 4789.7-2013《食品安全国家标准 副溶血性弧菌检验》
SN/T 1022-2010《出口食品中霍乱弧菌检验方法》
FDA BAM (Bacteriological Analytical Manual)
