Bolton肉汤基础：用于空肠弯曲菌选择性增菌培养的常用培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、配套添加成分及选择性原理

Bolton肉汤基础本身主要提供营养和复苏环境，选择性主要来自配套试剂中的抗菌成分以及培养条件。按产品使用方法，每100 mL基础培养基通常加入5 mL无菌脱纤维羊血或马血，并加入1支配套试剂TJ032，混匀后使用。血液成分能够改善弯曲菌生长环境，尤其对受损细胞的复苏有帮助；选择性试剂则用于抑制食品样品中的革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌以及真菌。

四、检验原理

空肠弯曲菌对氧较敏感，且营养需求较高。Bolton肉汤通过动物组织酶解物、乳蛋白水解物和酵母浸粉提供丰富营养，使目标菌能够在增菌阶段恢复活性并增殖。丙酮酸钠和偏亚硫酸氢钠可减轻氧化压力，改善弯曲菌在培养过程中的空气耐受性；α-酮戊二酸作为重要代谢中间体，可进一步促进目标菌生长；碳酸钠则帮助维持适宜的酸碱环境。

选择性方面，Bolton肉汤依靠配套抗菌试剂抑制样品中的杂菌。头孢哌酮和多黏菌素B主要限制部分革兰氏阴性伴随菌，万古霉素主要抑制革兰氏阳性菌，甲氧苄啶抑制部分细菌生长，两性霉素B用于控制酵母和霉菌。由于食品样品背景菌复杂，Bolton肉汤的作用并不是让空肠弯曲菌直接形成可见菌落，而是先进行选择性增菌，再通过改良CCD琼脂等平板进一步分离和确认。

五、使用方法

称取本品27.6 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解，按需要分装后，于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后，将基础培养基冷却至约45 ℃，每100 mL基础培养基加入5 mL无菌脱纤维羊血或马血，再加入1支配套试剂TJ032，充分混匀后备用。

使用时应注意，血液和选择性添加剂需在无菌条件下加入，且不应与基础培养基一同高压灭菌，以免血液成分变性或抗菌成分失活。配制后的培养基应避免长时间暴露于空气中，并按标准方法在微需氧条件下培养。若基础培养基灭菌后出现少量沉淀，一般与蛋白水解物、盐类或还原性成分受热后的相互作用有关，若颜色、pH和质控结果正常，通常不影响使用。

六、质量控制

七、结果判断与常见注意点

Bolton肉汤是增菌培养基，检测结果通常不能仅凭肉汤浑浊程度判断阳性或阴性。完成增菌后，应按标准方法转种至相应选择性平板，如改良CCD琼脂，观察典型菌落并进行后续确认。空肠弯曲菌在改良CCD平板上常形成灰白色、湿润、较扁平或扩散状菌落，但最终结果仍需结合形态、生化或其他确认试验判断。

若目标菌生长不良，应优先检查培养气氛是否为微需氧、培养温度是否准确、血液和添加剂是否按规定加入、添加剂是否失效，以及基础培养基pH是否正常。若杂菌抑制不足，则应检查选择性添加剂加入量、保存条件、配制后放置时间和样品背景菌量。弯曲菌对环境较敏感，样品运输、前处理和培养气氛控制都会显著影响检出效果。

八、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮结块。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩，避免吸入粉尘引起呼吸道不适。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。配制后的含血和抗生素培养基应按实验室验证条件保存，并尽量在规定期限内使用。

参考标准与资料

GB 4789.9《食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验》。

美国FDA Bacteriological Analytical Manual（BAM）Chapter 7：Campylobacter。