胆硫乳（DHL）琼脂：用于沙门氏菌、志贺氏菌等肠道致病菌分离的选择性鉴别培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

DHL琼脂的核心是“胆盐选择 + 糖发酵鉴别 + 硫化氢指示”。蛋白胨和牛肉膏粉提供基础营养，使肠道菌能够在平板上形成可观察菌落。去氧胆酸钠和柠檬酸钠共同构成选择性环境，可抑制革兰氏阳性菌和部分非目标菌，减少样品背景菌对目标菌的干扰。

乳糖和蔗糖用于观察糖发酵反应。大肠埃希氏菌等糖发酵菌可分解乳糖或蔗糖产酸，使中性红显色，形成粉红色至桃红色菌落；局部酸化还可促使去氧胆酸盐形成胆酸沉淀，因此菌落周围可见沉淀环或混浊区。沙门氏菌多数不发酵乳糖和蔗糖，通常形成无色或浅色半透明菌落；其中产硫化氢菌株可还原硫代硫酸钠生成H₂S，H₂S再与柠檬酸铁铵中的铁离子反应生成黑色硫化铁，因此菌落中心可出现黑心。志贺氏菌通常不产H₂S，常表现为无色至淡红色、半透明菌落。

需要注意的是，DHL琼脂上的菌落颜色和黑心只能用于初步筛选。部分沙门氏菌不产H₂S，部分非目标菌也可能形成相似菌落，因此疑似菌落必须进行后续确认。

四、使用方法

称取本品63.3 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装或直接冷却至适宜温度后倾注无菌平皿。本培养基通常无需高压灭菌。

DHL琼脂含有胆盐、糖类、指示剂和铁盐系统，过度加热或高压灭菌可能导致选择性下降、糖类分解、颜色异常或沉淀增加，因此配制时以煮沸完全溶解为宜。加热时应充分搅拌，避免局部过热和琼脂糊底。倒平板前应确认培养基均匀、无明显异常沉淀，平板凝固后应避免过度干燥或冷凝水过多，以免影响菌落形态和计数观察。

五、质量控制

六、典型菌落表现

七、对比实验结果整理

原资料中的对比实验显示，逗点Aiculture、H品牌和K品牌DHL琼脂对鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028、福氏志贺氏菌ATCC 12022、大肠埃希氏菌ATCC 25922和粪肠球菌ATCC 29212的培养表现均符合相应评定标准。为便于技术资料展示，可将结果精简为下表。

注：对比实验用于说明培养基性能是否满足质量控制要求，实际检测时仍应按实验室质控程序和相关标准要求执行。

八、结果观察与应用提示

沙门氏菌在DHL琼脂上通常形成无色或浅色半透明菌落，产H₂S菌株可出现黑心。志贺氏菌多表现为无色至淡红色、半透明菌落，一般不形成黑心。大肠埃希氏菌等乳糖发酵菌常形成粉红色或桃红色菌落，并可能伴随胆酸沉淀。由于不同菌株之间存在生化差异，不能将“无黑心”直接排除沙门氏菌，也不能将“黑心菌落”直接判定为沙门氏菌。

若目标菌生长率偏低，应检查培养基是否过度加热或误高压灭菌，pH是否正常，平板是否过度干燥，干粉是否吸潮，以及菌株活性是否良好。若革兰氏阳性菌抑制不足，应检查去氧胆酸钠和柠檬酸钠体系是否正常、培养基是否放置过久、配制温度是否过高或平板保存条件是否不当。若大肠埃希氏菌不显粉红色，应关注乳糖、蔗糖、中性红和pH状态。

九、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的平板应按实验室验证条件保存，并尽量在规定期限内使用。若平板出现明显变色、干裂、析水、污染或质控结果异常，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、平板和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB/T 13091-2018《饲料中沙门氏菌的测定》。

相关GB、SN食品和饲料微生物检验方法中沙门氏菌、志贺氏菌分离培养要求。