SS琼脂:用于沙门氏菌、志贺氏菌选择性分离培养的经典培养基

2026-06-23 15:05:11
逗点生物
简介

SS琼脂:用于沙门氏菌、志贺氏菌选择性分离培养的经典培养基

一、产品用途与基本信息

项目 内容
产品名称 SS琼脂
英文名称 Salmonella Shigella Agar
产品货号 GF1131
产品规格 250 g/瓶
产品类型 选择性鉴别琼脂培养基
主要用途 用于沙门氏菌、志贺氏菌的选择性分离培养
使用量 58.5 g/L
制备方式 加热煮沸至完全溶解,通常无需高压灭菌
推荐培养条件 36±1 ℃需氧培养18~24 h
沙门氏菌典型表现 无色或浅色菌落,部分菌株中心黑色
志贺氏菌典型表现 无色菌落,无黑心
最终pH 7.0±0.2(25 ℃)
保质期 未开封三年

二、配方组成、用量及作用

成分 用量(g/L) 主要作用 用途说明
牛肉膏粉 5.0 提供有机氮、矿物质和生长因子 改善培养基营养水平,支持肠道菌生长
蛋白胨 5.0 提供氮源、氨基酸、短肽和部分碳源 支持沙门氏菌、志贺氏菌等目标菌形成菌落
3号胆盐 3.5 选择性抑菌剂 抑制革兰氏阳性菌和部分胆盐敏感菌群
琼脂 17.0 凝固剂 形成稳定平板,便于菌落分离和观察
乳糖 10.0 可发酵糖类 区分乳糖发酵菌和非乳糖发酵菌
柠檬酸钠 8.5 辅助选择性成分 抑制部分大肠菌群和杂菌,提高培养基选择性
硫代硫酸钠 8.5 硫源 被部分细菌还原生成H₂S,用于硫化氢反应检测
柠檬酸铁 1.0 铁盐指示系统 与H₂S反应形成黑色硫化铁,使菌落中心变黑
中性红 0.025 pH指示剂 乳糖发酵产酸时菌落呈红色或桃红色
煌绿 0.00033 选择性抑菌染料 抑制部分革兰氏阳性菌、大肠菌群及其他非目标菌
最终pH 7.0±0.2 控制培养基酸碱环境 保证选择性、显色反应和H₂S反应稳定

注:原资料中的“示胨”不是常用规范配方名称,建议在产品资料中统一写作“蛋白胨”或明确具体胨类来源,以便客户理解和质量文件管理。

三、检验原理

SS琼脂的核心是“选择性抑菌 + 乳糖鉴别 + 硫化氢指示”。牛肉膏粉和蛋白胨提供基础营养,使沙门氏菌、志贺氏菌等目标菌能够在选择性条件下生长。3号胆盐、柠檬酸钠和煌绿共同形成选择性体系,可抑制革兰氏阳性菌及部分大肠菌群、变形杆菌等伴随菌,从而减少背景菌干扰。

乳糖用于区分乳糖发酵菌和非乳糖发酵菌。大肠埃希氏菌等乳糖发酵菌能分解乳糖产酸,使中性红显色,形成桃红色或红色菌落;沙门氏菌和志贺氏菌通常不发酵乳糖,因此多表现为无色或浅色菌落。培养基中的硫代硫酸钠可被部分细菌还原生成硫化氢,硫化氢与柠檬酸铁中的铁离子反应生成黑色硫化铁,因此产H₂S的沙门氏菌常形成黑色中心菌落。

需要注意的是,不同菌株的生化特征存在差异。并非所有沙门氏菌都一定产生明显黑心,也并非所有无色菌落都属于志贺氏菌。因此,SS琼脂主要用于分离和初筛,不能替代后续确认试验。

四、使用方法

称取本品58.5 g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装或冷却至适宜温度后倾注无菌平皿。本培养基通常无需高压灭菌。

SS琼脂含有胆盐、煌绿、中性红、乳糖和铁盐体系,过度加热或高压灭菌可能导致选择性下降、糖类受热分解、指示剂颜色异常或沉淀增加。因此,配制时以煮沸完全溶解为宜,不建议长时间反复加热。制备好的培养基宜当日使用;如需保存,可置冰箱内,并建议在18 h内使用。使用前应观察平板颜色、表面水分和污染情况,异常平板不宜用于检测。

五、质量控制

质控指标 质控菌株及编号 培养条件 质控评定标准 结果说明
生长率 福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 36±1 ℃需氧培养18~24 h PR≥0.5,无色菌落,无黑心 验证培养基对志贺氏菌的支持能力
生长率 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 36±1 ℃需氧培养18~24 h PR≥0.5,黑色中心菌落 验证培养基对沙门氏菌的支持能力和H₂S显色能力
选择性/特异性 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 36±1 ℃需氧培养18~24 h G<5,桃红色菌落 验证对乳糖发酵菌的限制及显色反应
选择性 粪肠球菌 ATCC 29212 36±1 ℃需氧培养18~24 h G≤1 验证对革兰氏阳性菌的抑制能力
选择性 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 36±1 ℃需氧培养18~24 h G≤1 可用于评价对革兰氏阳性菌的抑制效果

六、典型菌落表现

菌株或菌群 在SS琼脂上的常见表现 判读意义
鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 黑色中心菌落,周围可为无色或浅色 非乳糖发酵,H₂S阳性
肠炎沙门氏菌 CMCC(B)50760 黑色中心菌落 验证沙门氏菌典型分离表现
福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 无色菌落,无黑心 非乳糖发酵,H₂S阴性
大肠埃希氏菌 ATCC 25922 桃红色菌落 乳糖发酵产酸,中性红显色
粪肠球菌 ATCC 29212 生长受抑制,G≤1 体现胆盐和染料系统的选择性
金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 生长受抑制,G≤1 体现对革兰氏阳性菌的抑制能力

七、对比实验结果整理

原资料中的对比实验表明,按标签方法制备SS琼脂后,在36±1 ℃需氧培养18~24 h条件下,肠炎沙门氏菌、福氏志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌均能达到规定生长率要求,大肠埃希氏菌呈桃红色菌落,金黄色葡萄球菌受到明显抑制。为便于技术资料展示,可精简为下表。

测试菌株 接种量 评价方法 质控结果 典型特征
肠炎沙门氏菌 CMCC(B)50760 20~200 CFU 定量 PR≥0.5 黑色中心菌落
福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572 20~200 CFU 定量 PR≥0.5 无色菌落,无黑心
鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 20~200 CFU 定量 PR≥0.5 黑色中心菌落
大肠埃希氏菌 ATCC 25922 半定量 半定量 G≤1或明显受限 桃红色菌落
金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 半定量 半定量 G≤1 生长受抑制

注:原资料中质量控制部分对大肠埃希氏菌的标准写作“G<5”,而对比实验中写作“G≤1”。建议企业内部质量标准中统一评价口径,避免客户理解差异。

八、结果观察与应用提示

沙门氏菌在SS琼脂上多形成无色至浅色菌落,产硫化氢菌株可见黑色中心。志贺氏菌通常形成无色、透明或半透明菌落,不形成黑心。大肠埃希氏菌等乳糖发酵菌常形成桃红色菌落,因此可与沙门氏菌、志贺氏菌形成初步区别。

若目标菌生长率偏低,应重点检查培养基是否过度加热或误高压灭菌、平板是否放置过久、pH是否正常、煌绿和胆盐体系是否过强,以及菌株活性是否良好。SS琼脂对部分志贺氏菌菌株可能存在一定抑制性,因此志贺氏菌检测时应结合其他选择性平板共同判断。若大肠埃希氏菌抑制不足或颜色不典型,应检查乳糖、中性红、胆盐和培养基pH是否正常。

制好的SS琼脂平板宜尽快使用,长时间保存可能导致水分变化、选择性下降或颜色反应不稳定。平板表面过湿会造成菌落扩散,过干则可能降低受损菌恢复能力,均会影响结果观察。

九、与DHL琼脂的区别

SS琼脂和DHL琼脂都可用于沙门氏菌、志贺氏菌等肠道致病菌的选择性分离,但二者选择性和鉴别体系有所不同。SS琼脂含煌绿、胆盐和较高水平的柠檬酸钠,选择性较强,能较好抑制部分伴随菌,但对某些受损菌或敏感菌株也可能形成压力。DHL琼脂则通过去氧胆酸钠、糖发酵和H₂S系统进行选择和鉴别,在菌落特征上也有其应用特点。

实际检验中,选择哪一种平板应依据检测标准、样品类型和实验室验证结果确定。对于复杂样品,常需结合多种选择性培养基,以提高目标菌检出率并减少漏检风险。

十、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封,置于避光、干燥处保存,避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护,建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年;开封后受储存湿度、温度和使用频次影响,保质时间可能缩短。

配制后的平板宜当日使用;如需短时间保存,应置冰箱内,并建议在18 h内使用。若平板出现明显变色、干裂、析水、污染或质控结果异常,应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、平板和接触样品的耗材,应经高压灭菌后再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

SN/T 2206.1-2008《化妆品微生物检验方法 第1部分:沙门氏菌》。

相关GB、SN食品及进出口商品微生物检验方法中沙门氏菌、志贺氏菌分离培养要求。