溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基：用于压力蒸汽灭菌生物指示菌培养的显色培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

该培养基的核心是“芽孢复苏生长 + 葡萄糖产酸 + pH指示显色”。嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢在压力蒸汽灭菌监测中作为生物指示菌使用。若灭菌过程未能完全杀灭芽孢，残存芽孢在适宜温度下可萌发为营养细胞，并在培养基中生长繁殖。蛋白胨为其提供基础营养，葡萄糖提供能量来源，生长过程中产生酸性代谢物，使培养基pH下降。

溴甲酚紫是酸碱指示剂，在酸性环境下转为黄色。因此，培养后若培养基出现浑浊并伴随变黄，通常提示指示菌有生长和代谢活动；若培养基保持澄清且颜色不变，则提示未观察到指示菌生长。需要注意的是，培养基浑浊、变色必须结合阳性对照、阴性对照和灭菌监测流程综合判断，不能脱离生物指示物和操作条件单独解释。

四、使用方法

称取本品15.0 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解，按实验需要分装后，于115 ℃高压灭菌30 min，冷却备用。

本培养基含葡萄糖和指示剂，采用115 ℃灭菌30 min，有助于减少高温对糖类和指示剂的影响。配制时不建议随意提高灭菌温度或延长灭菌时间，以免培养基颜色加深、pH偏移或葡萄糖受热变化。灭菌后培养基应颜色均一、澄清或近澄清，无污染、无明显异常沉淀。

用于压力蒸汽灭菌监测时，应按生物指示物说明和相关标准方法操作。灭菌处理后的指示菌载体接入培养基中，置56±1 ℃培养24 h，并设置阳性对照和阴性对照。培养结束后观察培养液浑浊度和颜色变化。

五、质量控制

注：原资料中的“嗜热脂肪杆菌芽孢ATCC7953”建议规范为“嗜热脂肪地芽孢杆菌 ATCC 7953 芽孢”。历史资料中也常见 Bacillus stearothermophilus 的旧名称，现多按 Geobacillus stearothermophilus 表述。

六、结果判读

在灭菌效果监测中，阳性对照必须生长，阴性对照必须无生长。若阳性对照不浑浊，说明培养基、指示菌或培养条件可能存在问题；若阴性对照浑浊，则提示污染或操作问题。只有对照结果有效时，灭菌处理组的结果才具有判读意义。

七、与压力蒸汽灭菌监测的关系

压力蒸汽灭菌依赖温度、压力、饱和蒸汽和作用时间共同实现灭菌效果。化学指示卡可快速反映某些物理化学条件是否达到，但不能直接证明微生物被杀灭。生物指示物则以高耐热芽孢作为挑战对象，是评价灭菌效果的重要手段之一。

溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基用于生物指示菌培养阶段，其作用是让未被杀灭的芽孢能够在适宜条件下复苏，并通过浑浊和酸性显色表现出来。因此，它是灭菌监测流程中的“结果培养与观察介质”，不是灭菌剂，也不是直接用于样品微生物计数的培养基。

八、常见问题与原因分析

若ATCC 7953芽孢阳性质控不生长，应检查培养基配制浓度、pH、灭菌温度、培养温度、培养时间、指示菌芽孢活性和接种量。嗜热脂肪地芽孢杆菌适合高温培养，若培养温度过低或过高，都可能影响复苏和生长。

若培养基灭菌后颜色明显偏黄，可能是pH偏低、葡萄糖受热分解或灭菌过度导致；若颜色偏紫过深，可能与pH偏高有关。若未接种对照浑浊，说明培养基污染或分装灭菌不彻底。若灭菌监测样本出现轻微变色但不浑浊，应谨慎判读，必要时延长观察或复试，并结合生物指示物说明书要求。

九、贮存与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、颜色异常、pH异常、沉淀异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、指示菌载体、试管和接触样品的耗材，应按实验室生物安全要求进行高压灭菌处理后废弃。

参考标准与资料

GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》。

相关压力蒸汽灭菌过程监测、生物指示物培养和消毒效果评价资料。