0.5%葡萄糖肉汤培养基：用于无菌检查和消毒效果生物监测的营养恢复培养基
- 2026-06-23 15:08:24
- 逗点生物
0.5%葡萄糖肉汤培养基：用于无菌检查和消毒效果生物监测的营养恢复培养基
一、产品用途与基本信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | 0.5%葡萄糖肉汤培养基 |
| 英文名称 | 0.5% Dextrose Broth |
| 产品货号 | GF1149 |
| 产品规格 | 250 g/瓶 |
| 产品类型 | 液体营养恢复培养基 |
| 主要用途 | 用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查，以及消毒效果生物监测评价中指示菌培养 |
| 参考依据 | 《中华人民共和国药典》2020年版、2025年版；《消毒技术规范》（2002年版） |
| 使用量 | 23.0 g/L |
| 灭菌条件 | 115 ℃高压灭菌30 min |
| 推荐质控培养条件 | 35～37 ℃培养24 h |
| 典型结果 | 肉汤浑浊，浑浊度2 |
| 最终pH | 7.2±0.2（25 ℃） |
| 保质期 | 未开封三年 |
二、配方组成、用量及作用
| 成分 | 用量（g/L） | 主要作用 | 用途说明 |
|---|---|---|---|
| 胨类营养源 | 10.0 | 提供氮源、氨基酸、短肽和部分碳源 | 支持多种细菌复苏、生长和增殖 |
| 牛肉浸出粉 | 3.0 | 提供有机氮、矿物质、维生素和生长因子 | 增强培养基营养水平，提高指示菌恢复能力 |
| 葡萄糖 | 5.0 | 提供可快速利用的碳源和能源 | 促进细菌生长，0.5%浓度适合营养恢复培养 |
| 氯化钠 | 5.0 | 维持渗透压稳定 | 保持细胞正常生理状态，减少渗透压应激 |
| 最终pH | 7.2±0.2 | 控制培养基酸碱环境 | 保证多数质控菌和指示菌生长稳定 |
注：原资料中的“胨”建议在产品文章中规范表述为“胨类营养源”或“蛋白胨”，具体名称可按企业原料标准统一。
三、培养基原理
0.5%葡萄糖肉汤培养基的核心作用是“营养支持 + 能量补充 + 指示菌恢复”。胨类营养源和牛肉浸出粉提供微生物生长所需的氮源、氨基酸、短肽、矿物质和生长因子，使细菌能够在液体环境中恢复并增殖。葡萄糖是易利用的碳源，可为微生物代谢提供能量，有助于受损细胞或低数量细胞恢复生长。氯化钠维持适宜渗透压，避免因环境渗透压波动影响细胞活性。
该培养基为非选择性营养肉汤，适合多种细菌生长，因此在无菌检查和消毒效果监测中主要用于观察“是否有存活微生物能够恢复生长”。培养后肉汤变浑浊通常提示有微生物生长；若保持澄清，则提示在规定条件下未观察到生长。需要注意的是，肉汤浑浊只能说明有微生物生长，不能直接判定菌种，必要时应进行涂片、分离培养或进一步鉴定。
四、使用方法
称取本品23.0 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于115 ℃高压灭菌30 min，冷却备用。
该培养基含葡萄糖，灭菌时不建议随意提高温度或延长时间，以免葡萄糖受热变化、培养基颜色加深或pH偏移。灭菌后培养基应为澄清或近澄清液体，无污染、无明显异常沉淀或异味。用于无菌检查时，应按药典品种项下和无菌检查方法要求选择接种量、培养条件和观察时间；用于消毒效果生物监测时，应按相应监测方法接入处理后的指示菌载体或菌悬液，并设置必要的阳性、阴性和中和对照。
五、质量控制
| 质控指标 | 质控菌株及编号 | 培养条件 | 质控评定标准 | 结果说明 |
|---|---|---|---|---|
| 生长率 | 金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 | 35～37 ℃培养24 h | 浑浊度2 | 验证培养基对革兰氏阳性球菌的支持能力 |
| 生长率 | 肺炎链球菌 CMCC(B)31001 | 35～37 ℃培养24 h | 浑浊度2 | 验证培养基对营养要求较高菌株的支持能力 |
| 生长率 | 大肠埃希氏菌 CMCC(B)44102 | 35～37 ℃培养24 h | 浑浊度2 | 验证培养基对革兰氏阴性肠杆菌的支持能力 |
| 生长率 | 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104 | 35～37 ℃培养24 h | 浑浊度2 | 验证培养基对非发酵革兰氏阴性杆菌的支持能力 |
| 生长率 | 枯草芽孢杆菌黑色变种 ATCC 9372 | 35～37 ℃培养24 h | 浑浊度2 | 验证培养基对消毒监测相关芽孢指示菌的支持能力 |
| 外观检查 | 灭菌后培养基 | 室温观察 | 液体均一，无污染、无明显异常沉淀 | 评价配制和灭菌状态 |
| pH检查 | 灭菌冷却后培养基 | 25 ℃ | 7.2±0.2 | 保证菌体恢复和生长稳定 |
注：“枯草芽孢杆菌黑色变种”是历史常用名称，现多对应 Bacillus atrophaeus ATCC 9372。用于消毒效果评价时，应按具体方法要求选择指示菌种、载体、培养基和培养条件。
六、结果观察与判读
| 观察项目 | 阳性表现 | 阴性表现 | 判读提示 |
|---|---|---|---|
| 生长情况 | 肉汤浑浊、底部沉淀或菌膜形成 | 肉汤澄清，无明显生长 | 与未接种对照比较判断 |
| 质控结果 | 各阳性质控菌达到浑浊度2 | 阳性质控不生长或生长弱 | 应排查培养基、菌株和培养条件 |
| 无菌对照 | 应保持澄清 | 若浑浊则提示污染 | 该批试验不宜判读 |
| 消毒监测样品 | 若培养后浑浊，提示可能有指示菌存活 | 若澄清，提示未观察到指示菌生长 | 必须结合阳性对照、中和对照和方法要求判定 |
在无菌检查中，培养基是否支持微生物生长、供试品是否存在抑菌性、接种和培养条件是否符合要求，都会影响结果可靠性。对于硫酸链霉素等抗生素类供试品，残留药物可能抑制敏感菌生长，因此应按药典方法进行方法适用性试验，必要时采用薄膜过滤、充分冲洗、稀释或适当中和方式降低供试品抑菌影响。
在消毒效果生物监测中，若消毒剂残留未被有效去除或中和，可能导致假阴性；若操作污染，则可能导致假阳性。因此，单靠肉汤浑浊与否不能脱离对照独立判断，应结合中和剂有效性、阳性对照、阴性对照和指示菌回收结果综合评价。
七、与无菌检查和消毒监测的关系
0.5%葡萄糖肉汤培养基可用于特定无菌检查或指示菌培养场景，但它不是所有无菌检查的通用替代培养基。现行药典无菌检查通常对培养基种类、培养温度、培养时间、方法适用性和供试品抑菌性控制有明确要求。若产品项下或检验方法指定使用0.5%葡萄糖肉汤，应严格按规定执行；若未指定，则不应自行替代药典要求的其他培养基。
在消毒效果评价中，该培养基的作用是促进经过消毒处理后的指示菌恢复生长，便于判断处理是否有效。常见指示菌包括金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌以及芽孢类指示菌等。不同消毒方法、不同靶微生物和不同评价目的，对培养基、温度和观察时间的要求可能不同，应以具体规范为准。
八、常见问题与原因分析
若阳性质控菌株浑浊度不足，应检查培养基配制浓度、pH、灭菌温度、葡萄糖是否受热变化、菌株活性、接种量和培养温度。肺炎链球菌等营养要求较高或状态较弱的菌株，对菌龄、接种量和培养条件更敏感，必要时应使用新鲜培养物进行质控。
若无菌对照出现浑浊，应考虑分装容器污染、灭菌不彻底、操作污染或培养环境污染。若培养基灭菌后颜色明显加深，可能与葡萄糖受热分解或过度灭菌有关。若pH偏低，可能影响部分菌株恢复；若pH偏高，则可能影响葡萄糖代谢后的生长表现。
若用于消毒监测时样品管不浑浊，但阳性对照正常，应进一步确认消毒剂残留是否被中和、指示菌是否正确接入、载体是否充分转移，以及培养时间是否符合要求。若中和不充分，残留消毒剂会继续杀灭或抑制指示菌，造成结果偏低或假阴性。
九、贮存、废物处理与注意事项
本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。
配制后的培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、明显变色、pH异常、异常沉淀或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、指示菌载体、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。
参考标准与资料
《中华人民共和国药典》2020年版、2025年版相关无菌检查方法和品种项下要求。
《消毒技术规范》（2002年版）相关消毒效果评价和生物监测方法。
相关无菌检查、抗生素产品检验和消毒效果生物指示菌培养资料。
