缓冲动力-硝酸盐培养基：用于产气荚膜梭菌动力和硝酸盐还原试验的半固体培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

缓冲动力-硝酸盐培养基的核心是“一管两项”：一方面观察动力，另一方面检测硝酸盐还原能力。培养基中琼脂含量较低，呈半固体状态。用接种针沿中央垂直穿刺接种后，有动力的细菌会从穿刺线向周围扩散生长，使培养基出现弥散性混浊；无动力细菌通常只沿穿刺线生长，周围培养基相对清晰。

硝酸盐还原试验依赖培养基中的硝酸钾。若细菌具有硝酸盐还原能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐。培养结束后滴加硝酸盐还原试剂，若出现红色反应，表示硝酸盐已被还原为亚硝酸盐，为硝酸盐还原阳性。若滴加试剂后不变红，不能立即简单判为阴性，应按具体方法要求进一步加锌粉确认：加锌后变红通常说明硝酸盐仍存在，为硝酸盐还原阴性；加锌后仍不变红，则可能说明硝酸盐已被进一步还原为氮气或其他产物。

对于产气荚膜梭菌，典型表现通常为沿穿刺线生长、无明显扩散，提示无动力；滴加硝酸盐还原试剂后变红，提示硝酸盐还原阳性。由于产气荚膜梭菌为厌氧菌，实际操作中应按标准方法提供合适的厌氧或低氧培养条件，否则可能影响生长和判读。

四、使用方法

称取本品23.5 g，另取甘油5 mL，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解。分装试管后，于121 ℃高压灭菌15 min，灭菌后保持直立冷却，形成半固体深层培养基。

接种时使用无菌直针挑取纯培养菌落，从培养基中央垂直穿刺至接近管底，再沿原路线拔出。接种后按方法要求于36±1 ℃培养约24 h。培养结束后，先观察动力结果，再滴加硝酸盐还原试剂观察颜色反应。若需要进一步确认硝酸盐阴性结果，应按标准方法加锌粉判读。由于加试剂后会影响培养基状态，动力观察应在加试剂前完成。

五、质量控制

六、结果判读

动力试验的判读对培养基状态非常敏感。琼脂浓度偏高会限制运动菌扩散，琼脂浓度偏低则可能造成假性扩散。穿刺接种不直、接种量过大或试管被剧烈震动，也可能导致动力结果误判。硝酸盐还原试验则应注意试剂新鲜度和加入顺序，避免因试剂失效导致假阴性。

七、与产气荚膜梭菌鉴定的关系

产气荚膜梭菌检测通常包括样品处理、选择性分离、典型菌落观察、厌氧培养、革兰氏染色、生化鉴定和必要的确认试验。缓冲动力-硝酸盐培养基主要用于确认阶段，观察疑似菌株是否符合“无动力、硝酸盐还原阳性”等典型生化特征。

该培养基不能替代TSC琼脂等选择性分离培养基，也不能单独确认产气荚膜梭菌。若疑似菌在本培养基中表现为沿穿刺线生长并滴加试剂后变红，只能说明其符合动力和硝酸盐还原方面的特征，还需结合其他项目综合判定。

八、常见问题与原因分析

若产气荚膜梭菌质控菌株生长弱或不生长，应检查培养基配制浓度、甘油是否漏加、pH是否符合要求、灭菌条件是否合适、菌株活性是否正常、接种量是否足够，以及培养时是否提供适宜厌氧条件。产气荚膜梭菌对氧较敏感，培养环境不合适会直接影响结果。

若大肠埃希氏菌不扩散，应检查半固体琼脂浓度是否偏高、培养基是否过硬、培养温度是否合适、穿刺是否过浅或菌株动力是否正常。若无动力菌出现扩散，应排查穿刺操作是否偏斜、接种针是否搅动培养基、培养基是否过软或试管搬动过多。

若硝酸盐阳性质控不变红，应检查硝酸盐还原试剂是否失效、培养时间是否不足、接种菌是否生长良好、硝酸钾是否漏加或称量错误。若阴性质控变红，应排查菌株误用、污染或试剂操作错误。硝酸盐还原试剂应按要求保存，颜色异常或质控不合格时应更换。

九、与SIM动力培养基的区别

缓冲动力-硝酸盐培养基和SIM动力培养基都可用于动力观察，但检测项目不同。SIM培养基侧重硫化氢、吲哚和动力三项反应；缓冲动力-硝酸盐培养基则侧重动力和硝酸盐还原，尤其适用于产气荚膜梭菌等鉴定流程。

因此，选择培养基时应根据目标菌和标准方法要求确定，不能仅因都可观察动力而相互替代。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的半固体试管培养基应直立保存，避免脱水、裂隙、污染和气泡影响判读。若出现污染、pH异常、明显裂隙、凝胶过软或过硬、质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养物、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.13-2012《食品安全国家标准 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验》。

GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》。

相关食品和饮用天然矿泉水微生物检验方法中产气荚膜梭菌动力、硝酸盐还原和确认鉴定要求。