亚硒酸盐增菌液(SF):用于沙门氏菌选择性增菌培养的经典培养基

2026-06-23 15:08:42
逗点生物
简介

亚硒酸盐增菌液(SF):用于沙门氏菌选择性增菌培养的经典培养基

一、产品用途与基本信息

项目 内容
产品名称 亚硒酸盐增菌液(SF)
英文名称 Selenite Fecal Medium
产品货号 GF1157
产品规格 250 g/瓶
产品类型 沙门氏菌选择性液体增菌培养基
主要用途 用于沙门氏菌选择性增菌培养
参考依据 GB 18466-2005;相关沙门氏菌检验方法
使用量 36.5 g/L
配制方式 加热煮沸至完全溶解,冷至常温备用
灭菌要求 不可高压灭菌,不可过度煮沸
推荐培养条件 35~37 ℃培养24 h
后续分离 增菌后转种XLD等选择性平板
最终pH 7.0±0.2(25 ℃)
储存条件 2~8 ℃、避光、干燥保存
保质期 未开封三年

二、配方组成、用量及作用

成分 用量(g/L) 主要作用 用途说明
胰蛋白胨 10.0 提供氮源、氨基酸、短肽和部分碳源 支持沙门氏菌在选择性环境中恢复和增殖
乳糖 4.0 可发酵糖类 有助于部分伴随菌发酵产酸,缓冲亚硒酸盐还原过程中的pH变化,维持选择性环境
亚硒酸氢钠 4.0 选择性抑菌剂 抑制多数革兰氏阳性菌和部分非目标肠道菌,使沙门氏菌获得相对增殖优势
磷酸氢二钠 16.0 缓冲剂 与磷酸二氢钾共同维持培养基pH稳定
磷酸二氢钾 2.5 缓冲剂和磷源 稳定培养环境,减少酸碱波动对沙门氏菌生长和选择性的影响
最终pH 7.0±0.2 控制培养基酸碱环境 保证沙门氏菌增菌和亚硒酸盐选择性作用稳定

三、检验原理

亚硒酸盐增菌液的核心是“选择性抑制 + 沙门氏菌相对耐受 + 后续平板分离”。亚硒酸氢钠是培养基中的关键选择性成分,可抑制许多革兰氏阳性菌和部分非目标肠道菌。沙门氏菌对亚硒酸盐相对耐受,因此在合适的培养时间内可优先生长,提高后续平板分离检出的机会。

胰蛋白胨为沙门氏菌恢复和增殖提供基础营养,乳糖和磷酸盐缓冲体系有助于维持培养基pH稳定。亚硒酸盐类培养基对热较敏感,过度加热或高压灭菌可能导致亚硒酸盐分解或被还原,表现为培养基变红或出现异常颜色变化。一旦培养基变红,说明选择性成分状态可能已经改变,不应继续使用。

需要注意的是,亚硒酸盐增菌液的选择性具有时间依赖性。培养时间过短,沙门氏菌可能尚未充分增殖;培养时间过长,部分耐受背景菌也可能恢复生长,影响分离效果。因此,应按规定时间转种选择性平板。

四、使用方法

称取本品36.5 g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解。加热时以溶解为目的,不可长时间剧烈煮沸;培养基变红则不可使用。溶解后冷至常温备用,并按实验需要分装或接种。

本培养基不宜高压灭菌。配制过程中应避免过度加热、反复加热和长时间暴露于强光下。配制后的培养基应尽快使用;若需短期保存,应按企业验证条件和产品说明在2~8 ℃避光保存。使用前应检查外观和pH,若出现变红、沉淀异常、污染、浑浊或pH偏离,应停止使用。

五、质量控制

质控指标 质控菌株及编号 培养条件 质控评定标准 结果说明
生长率 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 14028 + 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 + 铜绿假单胞菌 ATCC 27853 混合接种 35~37 ℃培养24 h,转种XLD 肉汤混浊;在XLD上沙门氏菌>10 CFU,典型菌落可见中心黑色 验证沙门氏菌在竞争菌存在时仍可被富集
选择性 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 35~37 ℃培养24 h,转种TSA <100 CFU 验证对部分非目标革兰氏阴性菌的抑制作用
选择性 粪肠球菌 ATCC 29212 35~37 ℃培养24 h,转种TSA <100 CFU 验证对部分革兰氏阳性菌的抑制作用
外观检查 配制后培养基 室温观察 液体颜色正常,不变红,无污染、无异常沉淀 评价配制和加热状态
pH检查 配制后培养基 25 ℃ 7.0±0.2 保证选择性增菌环境稳定

注:产品资料中“XLD上>10 CFU,菌落无色,有黑心”建议在文章中表述为“典型沙门氏菌菌落可见中心黑色,具体颜色以XLD配方、培养条件和企业质控图谱为准”。在常见XLD平板上,沙门氏菌多表现为红色、淡红色或近无色菌落,中心可有黑色沉淀。

六、结果观察与判读

观察环节 典型表现 判读提示
SF增菌液 培养后可见肉汤混浊 仅表示有微生物生长,不能直接判定沙门氏菌阳性
XLD平板 疑似沙门氏菌可形成中心黑色菌落 需挑取疑似菌落进一步确认
TSA选择性评价 非目标菌回收<100 CFU 说明培养基具有一定抑制能力
异常结果 SF变红、污染、沉淀异常或pH异常 不宜用于检测或质控

亚硒酸盐增菌液的检测结果必须通过后续分离平板和确认试验来判断。若增菌液混浊但选择性平板无疑似沙门氏菌,可能是背景菌生长或目标菌未检出;若增菌液不明显混浊,但平板出现疑似菌落,也应按标准流程继续确认。对于复杂样品,建议结合其他选择性增菌液或标准方法规定的双增菌体系提高检出率。

七、与沙门氏菌检测流程的关系

沙门氏菌检测通常包括预增菌、选择性增菌、选择性分离、生化确认和血清学确认等步骤。亚硒酸盐增菌液属于选择性增菌环节,适合在目标菌数量较少、背景菌较多的样品中提高沙门氏菌检出机会。

在医疗机构污水、污泥或其他环境样品中,伴随菌复杂,直接平板分离容易受到干扰。SF增菌液通过亚硒酸盐选择压力降低部分非目标菌影响,再转种XLD等平板,可提高疑似沙门氏菌的分离效率。食品样品检测时,应按GB 4789.4等现行食品安全国家标准选择规定的增菌和分离流程。

八、配制与安全注意事项

亚硒酸氢钠属于具有毒性的选择性化学成分,称量、配制和废液处理时应注意个人防护。操作时建议佩戴口罩、手套和护目镜,避免吸入粉尘、皮肤接触或误食。配制后的废液、残余培养基和带菌材料应按实验室生物安全及化学品管理要求处理。

风险点 可能影响 控制建议
过度煮沸 亚硒酸盐分解或还原,培养基变红 加热至溶解即可,不长时间沸腾
高压灭菌 选择性下降、颜色异常 不高压灭菌
光照和高温储存 成分稳定性下降 2~8 ℃避光保存
粉尘吸入或皮肤接触 职业健康风险 佩戴口罩、手套,通风操作
检测废液 同时含选择剂和活菌 高压灭菌后按化学/生物废物要求处理

九、常见问题与原因分析

若培养基配制后变红,通常与过度加热、反复加热、原料受潮或亚硒酸盐还原有关,应弃用。若沙门氏菌质控菌株在XLD上回收不足,应检查培养基是否变红、pH是否符合要求、培养时间是否过长或过短、菌株活性是否正常、接种量是否合适,以及XLD平板是否合格。

若大肠埃希氏菌或粪肠球菌选择性不合格,应检查亚硒酸氢钠是否失效、培养基是否加热过度、储存温度是否符合2~8 ℃、是否长时间放置后使用,以及接种量是否过大。若增菌液明显混浊但后续平板杂菌多,可能说明选择性下降或样品背景菌负荷过高。

若培养基有沉淀或浑浊,应与未接种对照比较判断。未接种对照若出现浑浊,提示污染或配制不当,不应继续使用。亚硒酸盐增菌液对配制和保存条件较敏感,建议按照产品说明和实验室验证周期使用。

十、贮存与注意事项

本品应贮存于2~8 ℃、避光、干燥处,使用后立即旋紧瓶盖,避免吸潮、光照和高温导致性能下降。未开封产品在规定条件下保质期为三年;开封后受储存环境、开盖频次和密封状态影响,保质时间可能缩短。

本品不得用于临床检验。称量时注意粉尘防护,建议佩戴口罩、手套并在通风良好的环境中操作。配制后的培养基若出现变红、污染、pH异常或质控结果不符合要求,应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、平板和接触样品的耗材,应经121 ℃高压灭菌30 min后,再按实验室生物安全和含硒废物管理要求处理。

参考标准与资料

GB 18466-2005《医疗机构水污染物排放标准》。

GB 4789.4-2024《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》。

相关医疗机构污水、污泥及食品微生物检验方法中沙门氏菌选择性增菌和分离培养要求。