葡萄糖肉汤：用于β型溶血性链球菌增菌培养的基础营养肉汤

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、培养基原理

葡萄糖肉汤的核心作用是“营养支持 + 葡萄糖供能 + 液体增菌”。蛋白胨和牛肉膏粉为细菌提供氨基酸、短肽、维生素、矿物质和生长因子，使目标菌在液体环境中恢复并增殖。葡萄糖是易利用碳源，可为细菌代谢提供能量。氯化钠维持适宜渗透压，减少细胞在培养过程中的渗透压应激。

用于β型溶血性链球菌检测时，葡萄糖肉汤主要承担增菌作用。若样品中目标菌数量较少，通过肉汤培养可提高后续分离检出的机会。但溶血性链球菌的“溶血”特征必须在含血平板上观察，肉汤中只能看到混浊、沉淀或菌体生长，不能判断α、β或γ溶血类型。因此，葡萄糖肉汤阳性生长后，应继续转种血琼脂等培养基进行分离和确认。

四、使用方法

称取本品30.0 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，按实验需要分装后，于121 ℃高压灭菌15 min，冷却备用。

灭菌后的培养基应澄清或近澄清，无污染、无明显异常沉淀和异味。由于培养基含葡萄糖，不建议随意延长灭菌时间或反复高温加热，以免葡萄糖受热变化、颜色加深或pH偏移。若实验需要观察大肠埃希氏菌产气，应在分装时加入小倒管；若未放置小倒管，通常只能观察肉汤混浊，不能准确判断产气。

接种后一般于36 ℃培养24 h，观察肉汤是否浑浊。若用于β型溶血性链球菌增菌，培养后应转种血琼脂平板，观察典型菌落及β溶血圈，并结合镜检和后续鉴定试验综合判断。

五、质量控制

注：ATCC 21059 可规范表述为化脓性链球菌 Streptococcus pyogenes，用作β型溶血性链球菌质控菌株。若质控项目需要观察大肠埃希氏菌产气，应使用带小倒管的试管或其他经过验证的产气观察方式。

六、结果观察与应用提示

葡萄糖肉汤培养后，阳性生长通常表现为肉汤浑浊、底部沉淀或菌膜形成。β型溶血性链球菌在该培养基中应表现为生长良好、不产气；大肠埃希氏菌可表现为生长并产气。不同菌株的浑浊程度与接种量、培养时间、菌龄和培养条件有关，应与未接种空白对照比较判断。

该培养基不含选择性抑菌成分，因此样品中其他可在普通营养肉汤中生长的细菌也可能增殖。用于样品检测时，肉汤浑浊只能提示“有微生物生长”，不能直接判定存在β型溶血性链球菌。

七、与血琼脂和选择性增菌培养基的关系

葡萄糖肉汤、血琼脂和选择性增菌培养基在溶血性链球菌检测流程中作用不同。葡萄糖肉汤用于液体增菌，血琼脂用于观察溶血和菌落形态，选择性培养基则用于在背景菌较多时提高目标菌检出机会。

因此，葡萄糖肉汤不能替代血琼脂进行溶血观察，也不能替代确认试验。若检测目标是β型溶血性链球菌，应将增菌、分离、溶血观察和鉴定步骤结合使用。

八、常见问题与原因分析

若β型溶血性链球菌质控菌株生长不良，应检查培养基配制浓度、pH、灭菌条件、菌株活性、接种量、培养温度和培养时间。链球菌对培养条件较敏感，菌株保存时间过长、接种菌龄不合适或培养温度偏离，都可能导致浑浊度不足。

若大肠埃希氏菌不产气，应确认是否放置小倒管、葡萄糖是否漏加或受热变化、接种量是否合适、培养时间是否足够。没有小倒管时，不应简单判定“不产气”，因为气体可能逸散或不易观察。

若培养基灭菌后颜色加深，可能与葡萄糖受热反应或灭菌过度有关。若出现浑浊、絮状物或沉淀，应与未接种空白对照比较；空白对照若出现浑浊，提示污染或灭菌不彻底，应停止使用。

九、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的葡萄糖肉汤应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、明显变色、pH异常、异常沉淀或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌培养液、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 15979-2024《一次性使用卫生用品卫生要求》。

相关一次性使用卫生用品微生物检验中β型溶血性链球菌增菌、分离和确认方法资料。

葡萄糖肉汤和链球菌增菌培养相关微生物学资料。