缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤（EE肉汤）：用于肠杆菌科选择性增菌的经典培养基

一、产品用途与基本信息

二、配方组成、用量及作用

三、检验原理

EE肉汤的核心是“营养支持 + 胆盐选择 + 煌绿抑菌 + 缓冲稳定”。蛋白胨为细菌提供氨基酸、短肽和有机氮，葡萄糖为目标菌提供能量来源。肠杆菌科细菌通常能够利用葡萄糖产酸，并可在一定胆盐环境中生长，因此在EE肉汤中具有相对生长优势。

牛胆盐和煌绿是培养基的关键选择性成分。牛胆盐可抑制许多胆盐敏感菌，尤其是部分革兰氏阳性菌；煌绿作为抑菌染料，可进一步限制部分非目标菌生长。磷酸氢二钠和磷酸二氢钾组成缓冲体系，维持培养基pH相对稳定，减少葡萄糖代谢和样品基质带来的酸碱波动。

需要注意的是，EE肉汤选择性较强，但并不能只允许肠杆菌科生长。部分非目标菌在菌量较高或培养时间过长时仍可能生长。因此，增菌液变浑浊不能直接判定为肠杆菌科阳性，必须转种VRBGA等选择性平板，并结合后续确认试验综合判定。

四、使用方法

称取本品43.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解。加热时间不宜超过30 min，溶解后应迅速冷却，并在无菌条件下分装至无菌试管或容器中。该培养基无需高压灭菌。

EE肉汤不建议高压灭菌，原因在于配方中含有牛胆盐、煌绿和葡萄糖等成分，长时间高温处理可能导致选择性下降、颜色异常、葡萄糖受热变化或pH漂移。配制后的培养基应颜色均一、无污染、无明显异常沉淀。若出现明显变色、沉淀异常或质控不合格，应停止使用。

接种后于35～37 ℃培养18～24 h。培养结束后，应按标准方法转种至VRBGA等平板观察典型菌落。肠杆菌科疑似菌落通常在VRBGA上形成红色至紫红色菌落，周围可有胆盐沉淀环，但仍需进一步确认。

五、质量控制

注：原资料中“阪崎肠杆菌ATCC29544 在TSA上＜100 CFU”疑似质控指标归类或排版错误。阪崎肠杆菌现多归入克罗诺杆菌属，属于肠杆菌科，原则上应作为目标菌或生长支持评价对象；若作为选择性评价项目，应重新核对企业质控标准和菌株证书。

六、结果观察与判读

在肠杆菌科检验中，EE肉汤只是增菌步骤。完整判定通常需要结合选择性平板结果和确认试验。根据肠杆菌科定义，目标菌通常应符合发酵葡萄糖产酸、氧化酶阴性、需氧或兼性厌氧、革兰氏阴性无芽胞杆菌等特征。

七、与VRBGA的关系

EE肉汤和VRBGA常在肠杆菌科检验流程中配合使用。EE肉汤用于低水平样品或需要富集的样品，通过选择性增菌提高目标菌数量；VRBGA用于选择性分离和菌落观察。

因此，EE肉汤不能替代VRBGA进行分离计数，也不能替代葡萄糖发酵和氧化酶等确认项目。

八、为什么无需高压灭菌

EE肉汤采用加热煮沸溶解、迅速冷却和无菌分装的方式制备，不进行高压灭菌。其原因主要与培养基成分稳定性有关。胆盐、煌绿和葡萄糖在高温高压或长时间加热条件下可能发生变化，影响选择性、颜色和目标菌生长表现。加热时间过长还可能造成水分蒸发、浓度升高和pH偏移。

因此，配制时应做到“刚好溶解、避免过热、迅速冷却、无菌分装”。若实验室必须采用其他灭菌方式，应进行完整性能验证，确认目标菌生长率、非目标菌选择性和pH均符合要求后方可使用。

九、常见问题与原因分析

若大肠埃希氏菌或鼠伤寒沙门氏菌在VRBGA上回收不足，应检查EE肉汤配制浓度、pH、加热时间、培养温度、培养时间、菌株活性和VRBGA平板质量。若培养基加热过度，可能导致选择性成分变化或营养支持下降。

若非目标菌选择性不合格，应检查牛胆盐和煌绿是否称量准确、原料是否失效、培养基是否被过度稀释、培养时间是否过长以及接种量是否过大。选择性培养基的抑菌能力有限，背景菌数量过高时可能突破抑制。

若培养基颜色异常、沉淀明显或空白对照浑浊，应考虑配制污染、加热过度、水质问题或原料吸潮变质。由于EE肉汤无需高压灭菌，配制和分装过程的无菌操作尤为重要。若无菌分装控制不当，容易造成空白污染，影响结果可靠性。

十、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和煌绿性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度、光照和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的EE肉汤应按实验室验证条件保存，并尽量在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、明显变色、沉淀异常或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌增菌液、平板、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.41-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠杆菌科检验》。

缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤（EE肉汤）相关培养基资料。

肠杆菌科选择性增菌、VRBGA分离和确认鉴定相关食品微生物检验资料。