Fraser增菌肉汤（FB1、FB2）基础：用于李斯特氏菌选择性增菌的两步增菌培养基

一、产品用途与基本信息

二、基础配方组成、用量及作用

三、配套试剂与FB1、FB2的区别

Fraser增菌肉汤基础需要加入配套试剂后才形成完整的FB1或FB2。基础培养基中含有七叶苷，但黑色反应通常还需要铁盐参与；选择性抗菌成分也主要通过配套试剂补充。FB1和FB2的区别主要在于选择性强度和使用阶段不同。

配套试剂通常包括柠檬酸铁铵、萘啶酮酸、吖啶黄素等功能成分。柠檬酸铁铵提供铁离子，用于七叶苷水解后的黑色反应；萘啶酮酸和吖啶黄素用于抑制部分革兰氏阴性菌和非目标革兰氏阳性菌。由于这些成分对热较敏感，不能与基础培养基一同高压灭菌，应待基础培养基冷却至约50 ℃后加入。

四、检验原理

Fraser增菌肉汤的核心是“营养恢复 + 选择性抑菌 + 七叶苷水解显黑”。培养基中胰酪胨、蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供丰富营养，使受损或低数量李斯特菌在增菌阶段恢复并增殖。磷酸盐缓冲体系维持pH稳定，氯化钠和氯化锂提供选择压力，限制部分非目标菌生长。

李斯特菌可水解七叶苷，产生七叶素，即6,7-二羟基香豆素。该产物与配套试剂中铁离子反应，可形成黑色或棕黑色复合物，使培养基变黑。因此，Fraser肉汤变黑常作为李斯特菌疑似生长的重要提示。

不过，变黑并不是最终确认依据。部分其他微生物也可能具有七叶苷水解能力，样品基质也可能影响颜色观察。因此，Fraser增菌后必须转种PALCAM、Oxford、显色培养基等选择性分离平板，挑取疑似菌落进行纯化和确认。

五、使用方法

称取本品57.4 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热至完全溶解，分装后于121 ℃高压灭菌15 min。灭菌结束后冷却至约50 ℃。

配制FB1时，每225 mL基础培养基加入TJ049配套试剂A和B各1支，充分混匀后使用。配制FB2时，每100 mL基础培养基加入TJ071和TJ072各1支，充分混匀后使用。添加剂加入后应避免剧烈振荡产生大量泡沫，也不应再次高压灭菌。

配制后的完整增菌液应颜色均一，无污染、无明显异常沉淀。若加入铁盐后培养基颜色略有加深属于正常现象；若未接种即明显发黑、浑浊或出现异常沉淀，应结合空白对照和质控结果判断是否可用。

六、质量控制

注：英诺克李斯特菌即Listeria innocua，常作为李斯特菌属相关质控菌株。Fraser肉汤的性能评价不仅看培养液是否变黑，还需结合PALCAM等平板上的回收菌落数和典型菌落形态。

七、结果观察与判读

Fraser肉汤中的黑色反应具有提示意义，但不等于最终阳性。完整检测应结合分离平板、菌落形态、β溶血、运动性、生化反应、显色培养基表现或分子确认等项目进行综合判断。

八、与PALCAM、Oxford和显色培养基的关系

Fraser增菌肉汤用于选择性增菌，PALCAM、Oxford或李斯特菌显色培养基用于选择性分离和初筛。不同培养基在检测流程中的作用不同，不能互相替代。

因此，Fraser增菌肉汤阳性后必须转平板；平板出现疑似菌落后仍需确认试验，不能仅凭黑变或菌落颜色判定单核细胞增生李斯特氏菌。

九、常见问题与原因分析

若单核细胞增生李斯特氏菌质控菌在PALCAM上回收不足，应检查基础培养基配制浓度、pH、灭菌条件、配套试剂是否正确加入、添加剂是否过期或受热、培养温度和时间是否符合要求，以及菌株活性是否正常。若配套试剂温度过高时加入，可能导致选择剂性能下降或目标菌受抑。

若培养基不变黑，应检查是否漏加铁盐配套试剂、七叶苷是否失效、培养时间是否不足、菌株是否具有正常七叶苷水解能力。若培养基未接种即发黑，可能与配制污染、添加剂异常、铁盐反应或储存条件不当有关。

若大肠埃希氏菌或粪肠球菌选择性不合格，应检查氯化锂、萘啶酮酸、吖啶黄素等选择性成分是否有效，接种量是否过高，培养时间是否过长，以及是否误配FB1和FB2。FB1选择性相对温和，FB2选择性更强，二者应按流程使用。

十、标准更新与应用提示

GB 4789.30-2025采用Fraser增菌肉汤（FB1、FB2）替代旧版方法中的李氏增菌肉汤LB（LB1、LB2），这一变化使国内方法与ISO 11290系列方法更接近。对实验室而言，方法更新意味着培养基配套试剂、增菌流程、分离培养基和鉴定程序都需要同步确认。

在实际检测中，样品类型、背景菌数量、目标菌受损程度和培养条件都会影响李斯特菌检出率。Fraser体系通过两步增菌兼顾复苏和选择性，能提高检测可靠性，但仍必须严格按照标准方法执行，特别是增菌时间、转种量、培养温度和后续确认步骤。

十一、贮存、废物处理与注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮、结块和性能下降。称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩并在通风良好的环境中操作。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受储存湿度、温度和使用频次影响，保质时间可能缩短。

配制后的基础培养基和加入配套试剂后的完整培养基应按实验室验证条件保存，并在规定期限内使用。若出现污染、pH异常、未接种变黑、异常沉淀或质控结果不符合要求，应停止使用并排查原因。检测后的带菌增菌液、平板、试管和接触样品的耗材，应置于121 ℃高压灭菌30 min后，再按实验室生物安全要求处理。

参考标准与资料

GB 4789.30-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》。

ISO 11290-1:2017《食品链微生物学 单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌属检测和计数的水平方法 第1部分：检测方法》。

ISO 11290-2:2017《食品链微生物学 单核细胞增生李斯特菌和李斯特菌属检测和计数的水平方法 第2部分：计数方法》。

Fraser增菌肉汤、PALCAM琼脂和李斯特菌选择性增菌分离相关资料。