TBX琼脂培养基:大肠埃希氏菌计数的配方、显色原理及质控要点

2026-06-24 10:04:02
逗点生物
简介

TBX琼脂培养基:大肠埃希氏菌计数的配方、显色原理及质控要点

一、产品概况

项目 内容
产品名称 胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂培养基
英文名称 Tryptone Bile X-glucuronide Agar
货号 GF1249-250g
规格 250 g/瓶
产品类型 选择性显色固体培养基
用途 用于食品中大肠埃希氏菌的计数和初步鉴别
参考标准 GB 4789.38-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数》
典型结果 大肠埃希氏菌形成蓝绿色菌落
储存 避光、干燥、密封保存
保质期 三年,具体以产品标签为准

二、配方组成、用量、作用及用途

成分 用量 主要作用 在培养基中的用途
胰蛋白胨 20.0 g/L 提供肽类、氨基酸、氮源和碳源 支持大肠埃希氏菌及部分肠杆菌生长
3号胆盐 1.5 g/L 选择性抑制剂 抑制多数革兰氏阳性菌,减少背景菌干扰
BCIG环己胺盐 0.075 g/L X-β-D-葡萄糖醛酸苷显色底物 被β-葡萄糖醛酸苷酶水解后形成蓝绿色菌落
琼脂 11.2 g/L 凝固剂 形成固体平板,便于菌落分离和计数
最终pH 7.2±0.2(25 ℃) 维持适宜酸碱环境 保证目标菌生长和显色反应稳定

三、检验原理

大多数大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸苷酶。该酶可水解培养基中的BCIG显色底物,释放显色基团并在菌落处形成蓝绿色产物,使目标菌落与无色或白色非目标菌落形成明显差异。3号胆盐可抑制多数革兰氏阳性菌,尤其减少肠球菌等背景菌对结果判读的干扰。

反应环节 作用机制 典型表现
营养支持 胰蛋白胨提供目标菌生长所需营养 形成可见菌落
胆盐选择 3号胆盐抑制部分非目标菌 背景菌减少
显色底物水解 β-葡萄糖醛酸苷酶水解BCIG 释放显色基团
显色沉积 显色产物在菌落处沉积 菌落呈蓝绿色
特异性区分 非产酶菌通常不显蓝绿色 多呈白色或无色菌落

蓝绿色菌落可作为大肠埃希氏菌典型菌落进行计数或进一步确认;白色菌落通常提示非目标菌或β-葡萄糖醛酸苷酶阴性菌株,应结合标准要求判读。

四、使用方法

步骤 操作要点
1. 称量 称取本品32.8 g
2. 加水 加入蒸馏水或去离子水1 L
3. 溶解 搅拌加热煮沸至完全溶解
4. 分装 按实验需要分装
5. 灭菌 121 ℃高压灭菌15 min
6. 冷却 灭菌后冷却至适宜倒板温度
7. 倒板 无菌倾注灭菌平皿
8. 保存 平板凝固后倒置、避光、密封保存
9. 使用前检查 确认平板无污染、无裂纹、无明显冷凝水,颜色正常

TBX琼脂含显色底物,配制和保存时应避免长时间强光照射。灭菌后不宜长时间高温保温,也不建议反复融化,以免影响显色底物稳定性、胆盐选择性和培养基促生长能力。

五、结果观察与判读

产品质控条件为36 ℃培养24 h观察。食品样品检测时,应按GB 4789.38-2025或实验室作业指导书规定的培养条件和计数规则执行。

菌落表现 初步判断 说明
蓝绿色菌落 典型大肠埃希氏菌可疑菌落 可按方法要求计数或进一步确认
白色或无色菌落 非典型或非目标菌 通常不作为典型大肠埃希氏菌计数
蓝绿色较浅 可疑菌落 可能与培养时间、菌株状态或底物反应强度有关
背景菌较多 选择性不足或样品背景复杂 应复核培养基性能和样品稀释度
菌落融合 不宜计数 应选择更高稀释度或重新检测
空白对照有菌落 污染 检测结果无效,应复核无菌操作

计数时应选择菌落分散、颜色清晰、数量适宜的平板。若菌落颜色介于蓝绿色和白色之间,或样品背景菌复杂,应谨慎判读,必要时挑取可疑菌落进行确认。

六、质量控制

下列质控菌株接种后于36 ℃培养24 h,观察生长率、选择性和特异性表现。

质控项目 质控菌株及编号 预期结果 评价意义
生长率 大肠埃希氏菌 ATCC 25922 PR≥0.7,蓝绿色菌落 验证目标菌促生长能力和显色反应
选择性 粪肠球菌 ATCC 29212 G≤1 验证胆盐对革兰氏阳性菌的抑制能力
特异性 阴沟肠杆菌 ATCC 23355 生长良好,白色菌落 验证非目标菌与目标菌的显色差异
无菌性 未接种培养基 无菌落生长 验证培养基无菌性

若大肠埃希氏菌生长率低或不显蓝绿色,应排查干粉保存、显色底物稳定性、pH、灭菌条件和平板保存时间。若粪肠球菌生长明显,提示选择性可能不足;若阴沟肠杆菌出现蓝绿色,应复核显色体系和特异性。

七、与传统大肠埃希氏菌检测培养基的区别

传统大肠埃希氏菌检测常利用乳糖发酵、产气、吲哚反应或荧光底物等特征。TBX琼脂主要利用β-葡萄糖醛酸苷酶显色反应,使目标菌落呈蓝绿色,具有直观、便于计数的特点。

培养基或方法 主要判读依据 特点
TBX琼脂 β-葡萄糖醛酸苷酶显色,蓝绿色菌落 直观,便于计数
EC-MUG类培养基 MUG荧光、产气等反应 常用于MPN或确认体系
乳糖发酵类培养基 产酸、产气或颜色变化 传统方法,可能受其他乳糖发酵菌干扰
生化确认试验 吲哚、氧化酶、IMViC等 用于进一步确认

TBX琼脂的优势在于筛选直观,但本质上仍是选择性显色培养基。对于法规检测、限量判定或争议样品,应严格按照标准方法执行。

八、常见问题与原因分析

常见问题 可能原因 解决建议
大肠埃希氏菌不显蓝绿色 显色底物失效、培养不足、菌株β-葡萄糖醛酸苷酶阴性 用质控菌株复核,按规定时间培养
蓝绿色偏浅 培养时间不足、菌落小或平板保存时间过长 使用新鲜平板,培养至规定时间
非目标菌出现蓝绿色 背景菌有类似酶活性或判读误差 挑取可疑菌落进一步确认
粪肠球菌未被抑制 胆盐选择性不足或配制异常 检查称量、灭菌和干粉状态
平板背景变色 过度加热、光照或底物降解 避光保存,避免反复融化
菌落扩散或融合 接种量过大或平板表面过湿 调整稀释度,使用前适当干燥
质控菌生长率低 pH异常、灭菌过度、平板过干或干粉吸潮 复核配制和保存条件
计数重复性差 接种体积、稀释、培养条件不一致 统一操作并设置平行样

九、使用与储存注意事项

本品为实验室微生物检验用培养基,不得用于临床诊断。称量干粉时应避免吸入粉尘,建议佩戴口罩、手套和实验服,在通风良好环境下操作。干粉培养基使用后应立即密封,避免吸潮结块,并贮存于避光、干燥处。

注意事项 要求
用途限制 不得用于临床检验
个人防护 称量时佩戴口罩和手套,避免吸入粉尘
干粉保存 避光、干燥、密封保存
配制用水 使用蒸馏水或去离子水
灭菌条件 121 ℃高压灭菌15 min
避光要求 含显色底物培养基应尽量避光保存
平板保存 倒置、密封、避光,并按验证期限使用
结果确认 蓝绿色菌落为典型筛选结果,必要时按标准确认
废弃物处理 接种后培养物和平板需灭菌后处理

小结

胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂培养基是一种用于食品中大肠埃希氏菌计数的选择性显色培养基。胰蛋白胨提供营养,3号胆盐抑制部分非目标菌,BCIG环己胺盐作为显色底物,被大肠埃希氏菌的β-葡萄糖醛酸苷酶水解后形成蓝绿色菌落,便于计数和初步鉴别。

使用该培养基时,应注意显色底物的稳定性,避免过度加热、反复融化和长时间光照。质量控制应验证大肠埃希氏菌的生长率和显色反应、粪肠球菌的抑制效果,以及阴沟肠杆菌等非目标菌的特异性表现。正式食品检验应结合GB 4789.38-2025等现行标准方法执行,不能仅凭单个显色菌落脱离标准流程作出最终结论。