DO Supplement -His：用于制备缺组氨酸酵母筛选培养基的营养补充物

产品信息

DO Supplement -His 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、盐类、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸和核苷酸补充物。DO Supplement -His 的特点是缺少组氨酸，其余必要营养补充成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-His 培养基中，普通不能合成组氨酸的营养缺陷型酵母无法正常生长；而携带 HIS3 筛选标记、HIS3 报告基因被激活，或通过功能互补恢复组氨酸合成能力的酵母，可以在缺组氨酸条件下形成菌落。因此，DO Supplement -His 常用于筛选含 HIS3 标记质粒的酵母转化子，也常见于酵母双杂交系统中，用于检测蛋白互作是否激活 HIS3 报告基因。

需要注意的是，DO Supplement -His 本身不是完整培养基，不能单独用于培养酵母。它也不是抗生素或诱导剂，而是营养缺失筛选体系中的补充物。真正发挥筛选作用的是“培养基缺少组氨酸”这一条件，而不是该补充物直接抑制某类细胞。

配方组成与用途

SD/-His 培养基配制示例

以下为常见 SD/-His 培养基配方示例。不同批次或不同规格的 DO Supplement -His 推荐用量可能不同，因此实际添加量应以产品标签为准。

典型应用场景

DO Supplement -His 最常见的用途是筛选 HIS3 标记相关的酵母转化子。例如，若酵母宿主本身为 his3 缺陷型，只有转入携带 HIS3 标记质粒的细胞才能在 SD/-His 平板上生长。因此，SD/-His 可用于筛选成功获得目标质粒的酵母细胞。

在酵母双杂交实验中，HIS3 常作为报告基因之一。当诱饵蛋白和猎物蛋白发生相互作用时，转录激活结构域可驱动 HIS3 报告基因表达，使酵母在缺组氨酸培养基上生长。此时 SD/-His 平板可用于初步筛选可能存在蛋白互作的克隆。若需要提高筛选强度，部分体系还会加入 3-AT 等 HIS3 竞争性抑制剂，但是否加入以及加入浓度应根据载体系统和实验方案确定。

DO Supplement -His 也可用于功能互补实验。例如，将候选基因导入组氨酸合成缺陷酵母中，若候选基因能够恢复相关代谢功能，酵母即可在缺组氨酸条件下生长。此类实验中，阴性对照、阳性对照和空载体对照非常关键，否则容易误判背景生长或假阳性结果。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement -His，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB、20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

如果配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-His 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement -His 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。

对于要求较高的表达调控实验或对培养基颜色敏感的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。普通酵母杂交或常规筛选实验中，整体高压灭菌通常更方便，也能降低操作过程中的污染风险。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement -His 配制的 SD/-His 培养基应具备明确的缺组氨酸筛选能力。阳性菌株或携带 HIS3 标记的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少 HIS3 功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在组氨酸污染、Dropout 用错、菌株背景不匹配或筛选条件过低。

储存条件与注意事项

DO Supplement -His 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement -His 是用于制备缺组氨酸酵母合成培养基的 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-His 等具体培养基。该产品通过缺失组氨酸构建选择压力，适用于 HIS3 标记质粒筛选、酵母双杂交、报告基因检测、功能互补、离子耐受和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，配合正确的 YNB、碳源、pH 和对照菌株，才能获得可靠的筛选结果。