DO Supplement-Leu：用于制备缺亮氨酸酵母筛选培养基的营养补充物
- 2026-06-25 14:54:28
- 逗点生物
DO Supplement-Leu：用于制备缺亮氨酸酵母筛选培养基的营养补充物
产品信息
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | DO Supplement-Leu |
| 中文名称 | 缺亮氨酸氨基酸补充物 |
| 英文名称 | Dropout Supplement-Leucine |
| 产品货号 | GF913 |
| 包装规格 | 20 g/瓶 |
| 储存条件 | 2～8℃密封保存 |
| 运输条件 | 常温运输 |
| 有效期 | 2 年 |
| 产品用途 | 用于配制 SD/-Leu 等缺亮氨酸酵母合成培养基，适用于 LEU2 标记筛选、酵母双杂交、功能互补、质粒维持和营养缺陷型筛选实验 |
DO Supplement-Leu 的作用原理
酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、无机盐、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸、腺嘌呤、尿嘧啶等营养补充物。DO Supplement-Leu 的特点是缺少亮氨酸，其余必要营养成分则用于支持酵母基础生长。
在 SD/-Leu 培养基中，不能合成亮氨酸的营养缺陷型酵母通常无法正常生长；而携带 LEU2 筛选标记、通过质粒补充 LEU2 功能，或通过功能互补恢复亮氨酸合成能力的酵母细胞，可以在缺亮氨酸条件下形成菌落。因此，DO Supplement-Leu 常用于筛选含 LEU2 标记质粒的酵母转化子，也常用于酵母双杂交系统中含 LEU2 标记载体的维持和筛选。
需要明确的是，DO Supplement-Leu 不是抗生素、诱导剂或报告基因激活剂。它的作用是配合 YNB 和碳源构建缺亮氨酸培养环境，通过营养缺陷实现筛选，而不是直接抑制某类细胞或直接激活基因表达。
配方组成与用途
| 成分或组分 | 用量 | 主要作用 | 对培养基用途的贡献 |
|---|---|---|---|
| DO Supplement-Leu | 按产品标签加入 | 提供除亮氨酸外的氨基酸、碱基等营养补充物 | 构建缺亮氨酸筛选环境，用于 LEU2 标记或亮氨酸营养缺陷相关筛选 |
| YNB（无氨基酸） | 6.7 g/L，常用于酿酒酵母体系 | 提供硫酸铵、无机盐、维生素和微量元素 | 构成酵母合成培养基的基础营养体系 |
| 葡萄糖 | 20.0 g/L | 提供主要碳源和能源 | 支持酵母在缺陷型培养基中生长 |
| 琼脂 | 20.0 g/L，仅平板使用 | 培养基凝固剂 | 制备 SD/-Leu 固体平板，便于转化子筛选和菌落挑取 |
| pH | 常调至约 5.8 | 维持适宜酵母生长环境 | 有助于提高培养条件一致性 |
SD/-Leu 培养基配制示例
以下为常见 SD/-Leu 培养基配方示例。不同规格的 DO Supplement-Leu 推荐用量可能不同，因此实际添加量应以产品标签为准，不建议脱离标签固定套用。
| 培养基类型 | 1 L 配方示例 | 主要用途 |
|---|---|---|
| SD/-Leu 液体培养基 | YNB 6.7 g + 葡萄糖 20.0 g + DO Supplement-Leu 按标签加入，补水至 1 L，pH 调至约 5.8 | 用于缺亮氨酸条件下的酵母液体培养、质粒维持和功能筛选 |
| SD/-Leu 平板培养基 | YNB 6.7 g + 葡萄糖 20.0 g + DO Supplement-Leu 按标签加入 + 琼脂 20.0 g，补水至 1 L，pH 调至约 5.8 | 用于酵母转化子筛选、单菌落分离和 LEU2 标记质粒筛选 |
| SD/-Leu 与其他缺陷组合 | 根据实验目的更换为双缺、三缺或四缺 Dropout Supplement | 用于酵母双杂交、多质粒共转化和多营养标记筛选 |
典型应用场景
DO Supplement-Leu 最常见的用途是筛选 LEU2 标记相关的酵母转化子。例如，若酵母宿主为 leu2 缺陷型，只有转入携带 LEU2 标记质粒的细胞才能在 SD/-Leu 培养基上生长。因此，SD/-Leu 常用于筛选成功获得目标质粒的酵母细胞。
在酵母双杂交实验中，LEU2 常用于维持某一类载体。例如部分系统中诱饵载体或猎物载体带有 LEU2 标记，转化后可通过 SD/-Leu 平板筛选含对应质粒的酵母克隆。若实验同时需要筛选两个质粒，则常使用 SD/-Leu/-Trp 等双缺培养基；若进一步检测报告基因激活，则可能使用 SD/-Leu/-Trp/-His 或 SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade 等更严格的筛选体系。
DO Supplement-Leu 也可用于功能互补实验。例如，将候选基因导入亮氨酸合成缺陷酵母中，若候选基因或质粒标记能够恢复亮氨酸相关营养功能，酵母即可在缺亮氨酸条件下生长。此类实验中，阳性对照、阴性对照和空载体对照非常关键，否则容易将背景生长误判为阳性结果。
使用方法
按产品标签称取适量 DO Supplement-Leu，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB 和 20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。
若配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-Leu 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement-Leu 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。
对于普通酵母筛选实验，整体高压灭菌操作简便，且有助于降低污染风险。对于表达调控、碳源敏感或对培养基颜色要求较高的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。
灭菌方式与葡萄糖颜色变化
SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。
对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。
质量控制与结果观察
使用 DO Supplement-Leu 配制的 SD/-Leu 培养基应具备明确的缺亮氨酸筛选能力。阳性菌株或携带 LEU2 标记的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少 LEU2 功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在亮氨酸污染、Dropout 用错、菌株背景不匹配或筛选压力不足。
| 检查项目 | 合格表现 | 可能异常 |
|---|---|---|
| 粉剂状态 | 干燥、均匀、无严重结块 | 吸潮、结块、变色、异味 |
| 培养基外观 | 灭菌后均一，无明显异常沉淀 | 明显褐变、焦化气味、沉淀异常 |
| 阳性对照 | LEU2 阳性或互补阳性菌株可生长 | 生长弱或不生长，需检查碳源、YNB、pH 或菌株状态 |
| 阴性对照 | LEU2 阴性菌株不生长或明显受限 | 背景生长高，需检查补充物是否用错或污染 |
| 平板状态 | 凝固良好，表面平整，无污染 | 平板失水、开裂、污染或表面水分过多 |
储存条件与注意事项
DO Supplement-Leu 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。
本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。
小结
DO Supplement-Leu 是用于制备缺亮氨酸酵母合成培养基的 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-Leu 等具体培养基。该产品通过缺失亮氨酸构建选择压力，适用于 LEU2 标记质粒筛选、酵母双杂交、质粒维持、功能互补、离子耐受和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，配合正确的 YNB、碳源、pH 和对照菌株，才能获得可靠的筛选结果。
