DO Supplement-Ade：用于制备缺腺嘌呤酵母筛选培养基的营养补充物

产品信息

DO Supplement-Ade 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、无机盐、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸、尿嘧啶等营养补充物。DO Supplement-Ade 的特点是缺少腺嘌呤，其余必要营养成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-Ade 培养基中，不能合成腺嘌呤的 ade 缺陷型酵母通常无法正常生长；而携带 ADE1、ADE2 等筛选标记，或通过报告基因激活、功能互补恢复腺嘌呤合成能力的酵母细胞，可以在缺腺嘌呤条件下形成菌落。因此，DO Supplement-Ade 可用于筛选腺嘌呤合成相关标记阳性的酵母，也常用于酵母双杂交系统中更高强度的报告基因筛选。

需要明确的是，DO Supplement-Ade 不是抗生素、诱导剂或显色试剂。它的作用是配合 YNB 和碳源构建缺腺嘌呤培养环境，通过营养缺陷实现筛选，而不是直接杀灭未转化细胞，也不是直接激活报告基因。

配方组成与用途

SD/-Ade 培养基配制示例

以下为常见 SD/-Ade 培养基配方示例。不同规格的 DO Supplement-Ade 推荐用量可能不同，因此实际添加量应以产品标签为准，不建议脱离标签固定套用。

典型应用场景

DO Supplement-Ade 最常见的用途之一是腺嘌呤营养缺陷相关筛选。例如，若酵母宿主为 ade 缺陷型，只有导入能够恢复腺嘌呤合成能力的质粒、基因或报告系统后，细胞才能在 SD/-Ade 培养基上生长。因此，SD/-Ade 可用于筛选 ADE1、ADE2 等相关标记阳性的酵母细胞，也可用于功能互补实验。

在酵母双杂交实验中，ADE2 或相关腺嘌呤合成标记常作为较严格的报告基因之一。当诱饵蛋白和猎物蛋白发生互作并激活报告基因表达时，酵母可在缺腺嘌呤培养基上生长。相比单纯营养标记维持，SD/-Ade 条件通常用于增强筛选强度或验证互作信号，因此应配合阴性对照、阳性对照和空载体对照使用。

DO Supplement-Ade 也与酵母菌落颜色观察有关。部分 ade1、ade2 突变株在腺嘌呤受限条件下可能出现红色或粉红色表型；而在缺腺嘌呤选择培养基中，是否能够生长以及菌落颜色表现会受到菌株背景、突变位点、培养时间和培养条件影响。因此，SD/-Ade 的判读应以“是否生长”和对照结果为主，不能仅凭颜色变化判断筛选结果。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement-Ade，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB 和 20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

若配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-Ade 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement-Ade 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。

对于普通酵母筛选实验，整体高压灭菌操作简便，且有助于降低污染风险。对于表达调控、碳源敏感或对培养基颜色要求较高的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement-Ade 配制的 SD/-Ade 培养基应具备明确的缺腺嘌呤筛选能力。阳性菌株或能够恢复腺嘌呤合成能力的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少 ADE 功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在腺嘌呤污染、Dropout 用错、菌株背景不匹配或筛选压力不足。

储存条件与注意事项

DO Supplement-Ade 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement-Ade 是用于制备缺腺嘌呤酵母合成培养基的 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-Ade 等具体培养基。该产品通过缺失腺嘌呤构建选择压力，适用于 ADE1、ADE2 等相关标记筛选、酵母双杂交、报告基因检测、功能互补、离子耐受和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，配合正确的 YNB、碳源、pH 和对照菌株，才能获得可靠的筛选结果。