DO Supplement-Leu-Trp：用于制备缺亮氨酸、缺色氨酸酵母双缺筛选培养基的补充物

产品信息

DO Supplement-Leu-Trp 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、无机盐、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸、腺嘌呤、尿嘧啶等营养补充物。DO Supplement-Leu-Trp 的特点是同时缺少亮氨酸和色氨酸，其余必要营养成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-Leu/-Trp 培养基中，leu2、trp1 等营养缺陷型酵母只有在同时获得对应功能补充后才能生长。例如，在常见酵母双杂交系统中，一个载体常带有 LEU2 标记，另一个载体常带有 TRP1 标记。转化后接种至 SD/-Leu/-Trp 平板，能够生长的菌落通常表示细胞同时携带两种质粒，因此该培养基常用于双质粒共转化子的筛选和维持。

需要明确的是，DO Supplement-Leu-Trp 不是抗生素、诱导剂或报告基因激活剂。它的作用是配合 YNB 和碳源构建缺亮氨酸、缺色氨酸的双缺营养环境，通过营养缺陷实现筛选，而不是直接杀灭未转化细胞，也不是直接证明蛋白互作发生。若需要进一步判断互作或报告基因激活，通常还需要使用缺组氨酸、缺腺嘌呤等更高强度筛选培养基或显色检测体系。

配方组成与用途

SD/-Leu/-Trp 培养基配制示例

以下为常见 SD/-Leu/-Trp 培养基配方示例。不同规格的 DO Supplement-Leu-Trp 推荐用量可能不同，因此实际添加量应以产品标签为准，不建议脱离标签固定套用。

典型应用场景

DO Supplement-Leu-Trp 最常见的用途是酵母双杂交实验中的双质粒筛选。在许多双杂交系统中，诱饵质粒和猎物质粒分别携带不同营养标记，例如 TRP1 和 LEU2。转化后使用 SD/-Leu/-Trp 平板培养，可以筛选同时携带两种质粒的酵母克隆，为后续互作筛选提供基础菌株。

需要注意的是，SD/-Leu/-Trp 通常用于判断“双质粒是否同时存在”，并不等同于判断蛋白互作是否发生。蛋白互作筛选通常还需要进一步转接至 SD/-Leu/-Trp/-His、SD/-Leu/-Trp/-Ade 或含 X-α-Gal、Aureobasidin A 等体系中，具体取决于所用酵母双杂交系统和报告基因设计。

DO Supplement-Leu-Trp 也可用于多质粒共转化、功能互补和营养标记组合筛选。例如，当实验设计需要同时维持 LEU2 标记载体和 TRP1 标记载体时，SD/-Leu/-Trp 培养基可以提供持续选择压力，减少质粒丢失。此类实验应设置阳性对照、阴性对照和空载体对照，并确认宿主菌株确实具有 leu2、trp1 等对应营养缺陷背景。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement-Leu-Trp，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB 和 20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

若配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-Leu/-Trp 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement-Leu-Trp 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。

对于普通酵母筛选实验，整体高压灭菌操作简便，且有助于降低污染风险。对于表达调控、碳源敏感或对培养基颜色要求较高的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement-Leu-Trp 配制的 SD/-Leu/-Trp 培养基应具备明确的双缺筛选能力。阳性菌株或同时具备 LEU2/TRP1 功能的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少任一对应功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在亮氨酸或色氨酸污染、Dropout 用错、菌株背景不匹配或筛选压力不足。

储存条件与注意事项

DO Supplement-Leu-Trp 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement-Leu-Trp 是用于制备缺亮氨酸、缺色氨酸酵母合成培养基的双缺 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-Leu/-Trp 等具体培养基。该产品通过同时缺失亮氨酸和色氨酸构建双重营养筛选压力，适用于 LEU2/TRP1 标记筛选、酵母双杂交双质粒维持、多质粒共转化、功能互补和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，配合正确的 YNB、碳源、pH、宿主菌株基因型和对照体系，才能获得可靠的筛选结果。