DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade：用于酵母四缺筛选培养基的 Dropout 补充物

产品信息

DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、无机盐、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸、碱基或核苷酸类补充物。DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 的特点是同时缺少组氨酸、亮氨酸、色氨酸和腺嘌呤，其余必要营养成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-His/-Leu/-Trp/-Ade 培养基中，his3、leu2、trp1、ade2 等营养缺陷型酵母只有在获得相应功能补充后才能生长。常见酵母双杂交体系中，-Leu 和 -Trp 通常用于维持诱饵质粒和猎物质粒，-His 和 -Ade 则常用于检测报告基因是否被激活。因此，四缺培养基比 SD/-Leu/-Trp 双缺培养基筛选强度更高，更适合用于蛋白互作阳性克隆筛选或复筛。

需要明确的是，DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 不是抗生素、诱导剂或显色试剂。它的作用是配合 YNB 和碳源构建四缺营养筛选环境，通过营养缺陷实现选择；是否能在该培养基上生长，取决于宿主菌株基因型、质粒筛选标记、报告基因激活状态和实验体系设计。

配方组成与用途

SD/-His/-Leu/-Trp/-Ade 培养基配制示例

以下为常见四缺培养基配方示例。不同规格的 DO Supplement 推荐添加量可能不同，实际操作应以产品标签为准，不建议脱离标签固定套用。

典型应用场景

DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 最常见的用途是酵母双杂交实验中的高强度筛选。在许多双杂交体系中，诱饵质粒和猎物质粒分别携带 TRP1、LEU2 等营养标记，双质粒共转化子首先可在 SD/-Leu/-Trp 平板上生长。若诱饵蛋白和猎物蛋白发生相互作用，并进一步激活 HIS3、ADE2 等报告基因，则菌株可在 SD/-His/-Leu/-Trp/-Ade 四缺培养基上生长。

因此，四缺培养基更适合用于互作阳性克隆筛选或复筛，而不是单纯判断双质粒是否存在。若实验只需要确认两种质粒是否同时进入酵母，通常使用 SD/-Leu/-Trp 即可；若需要判断蛋白互作或报告基因激活，才会使用含 -His、-Ade 的更严格筛选体系。部分系统还会配合 X-α-Gal、Aureobasidin A 或 3-AT 等添加剂提高判读能力，但是否添加应根据载体系统和宿主菌株说明确定。

DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 也可用于功能互补、营养标记组合筛选和突变体鉴定。由于四缺体系筛选压力较强，对菌株状态、接种量、培养时间和宿主背景要求较高，实验中必须设置阳性对照、阴性对照和空载体对照。若缺少对照，仅凭“是否长菌”判断结果，容易将自激活、背景生长或菌株状态差误判为实验结论。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB 和 20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

若配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL 四缺平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于 2～8℃保存，避免反复受潮。

对于普通酵母筛选实验，整体高压灭菌操作简便，且有助于降低污染风险。对于表达调控、碳源敏感、报告系统背景严格控制或培养基颜色要求较高的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 配制的四缺培养基应具备明确的筛选能力。阳性对照应能在培养基上生长；阴性对照、自激活对照或缺少相应报告基因激活的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示存在自激活、Dropout 用错、营养成分污染、菌株背景不匹配或筛选压力不足。

储存条件与注意事项

DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement-His-Leu-Trp-Ade 是用于制备缺组氨酸、缺亮氨酸、缺色氨酸、缺腺嘌呤酵母合成培养基的四缺 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-His/-Leu/-Trp/-Ade 等具体培养基。该产品常用于酵母双杂交中的双质粒维持和 HIS/ADE 报告基因筛选，也适用于功能互补、营养标记组合筛选和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，并结合宿主菌株基因型、质粒标记、报告基因系统和对照结果进行判读。