DO Supplement-His-Leu-Trp：用于制备缺组氨酸、缺亮氨酸、缺色氨酸酵母三缺培养基的补充物

产品信息

DO Supplement-His-Leu-Trp 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由 YNB、碳源和 Dropout Supplement 三部分组成。YNB 提供硫酸铵、无机盐、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源和能源；Dropout Supplement 提供除目标缺失成分以外的氨基酸、腺嘌呤、尿嘧啶等营养补充物。DO Supplement-His-Leu-Trp 的特点是同时缺少组氨酸、亮氨酸和色氨酸，其余必要营养成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-His/-Leu/-Trp 培养基中，his3、leu2、trp1 等营养缺陷型酵母只有在获得相应功能补充后才能生长。常见酵母双杂交体系中，-Leu 和 -Trp 通常用于维持诱饵质粒和猎物质粒，-His 则常用于检测 HIS3 报告基因是否被激活。因此，SD/-His/-Leu/-Trp 三缺培养基常用于在确认双质粒存在的基础上，进一步筛选可能发生蛋白互作或报告基因激活的阳性克隆。

需要明确的是，DO Supplement-His-Leu-Trp 不是抗生素、诱导剂或显色试剂。它的作用是配合 YNB 和碳源构建缺组氨酸、缺亮氨酸、缺色氨酸的营养筛选环境，通过营养缺陷实现选择，而不是直接杀灭未转化细胞，也不是直接证明蛋白互作发生。蛋白互作结论仍需结合阳性对照、阴性对照、自激活检测及必要的复筛实验判断。

配方组成与用途

SD/-His/-Leu/-Trp 培养基配制示例

以下为常见 SD/-His/-Leu/-Trp 培养基配方示例。不同规格的 DO Supplement-His-Leu-Trp 推荐添加量可能不同，因此实际使用时应以产品标签为准，不建议脱离标签固定套用。

典型应用场景

DO Supplement-His-Leu-Trp 最常见的用途是酵母双杂交实验中的三缺筛选。在许多双杂交体系中，诱饵质粒和猎物质粒分别携带 TRP1、LEU2 等营养标记，双质粒共转化子首先可在 SD/-Leu/-Trp 平板上生长。若诱饵蛋白和猎物蛋白发生相互作用，并激活 HIS3 报告基因，则菌株可在 SD/-His/-Leu/-Trp 三缺培养基上生长。

因此，三缺培养基通常用于互作阳性克隆的初筛或复筛，而不是单纯判断双质粒是否存在。若实验只需要确认两种质粒是否同时进入酵母，通常使用 SD/-Leu/-Trp 即可；若需要进一步判断 HIS3 报告基因是否被激活，才使用 SD/-His/-Leu/-Trp。部分体系还会加入 3-AT 抑制 HIS3 背景表达，以提高筛选严格度，但是否添加及添加浓度应根据宿主菌株、载体系统和预实验结果确定。

DO Supplement-His-Leu-Trp 也可用于功能互补、营养标记组合筛选和突变体鉴定。由于三缺体系筛选压力较强，对菌株状态、接种量、培养时间和宿主背景要求较高，实验中应设置阳性对照、阴性对照和空载体对照。若阴性对照也能明显生长，应优先排查自激活、营养污染、Dropout 用错或筛选压力不足。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement-His-Leu-Trp，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB 和 20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素、3-AT 或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

若配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-His/-Leu/-Trp 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement-His-Leu-Trp 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。

对于普通酿酒酵母筛选实验，整体高压灭菌操作简便，且有助于降低污染风险。对于表达调控、碳源敏感、报告系统背景严格控制或培养基颜色要求较高的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement-His-Leu-Trp 配制的 SD/-His/-Leu/-Trp 培养基应具备明确的三缺筛选能力。阳性菌株或能够满足组氨酸、亮氨酸、色氨酸营养需求的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少任一相应功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在组氨酸、亮氨酸或色氨酸污染，或存在自激活、Dropout 用错、宿主背景不匹配、筛选压力不足等问题。

储存条件与注意事项

DO Supplement-His-Leu-Trp 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement-His-Leu-Trp 是用于制备缺组氨酸、缺亮氨酸、缺色氨酸酵母合成培养基的三缺 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-His/-Leu/-Trp 等具体培养基。该产品常用于酵母双杂交中的双质粒维持和 HIS3 报告基因筛选，也适用于功能互补、营养标记组合筛选、酵母蛋白表达、离子耐受和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，并结合宿主菌株基因型、质粒标记、报告基因系统、3-AT 条件和对照结果进行判读。