牛奶中氯霉素检测的固相萃取方法（Copure® C18）
- 2019-07-30 11:01:07
- 逗点生物
一、样品提取
准确称取牛奶 5.00 g( 精确到 0.01 g)，加入乙酸乙酯 15mL，涡旋振荡 1 min，摇床振荡 10 min；3000 r/min 转速离心10 min。将上清液转移至试管中，于45 ℃氮吹吹干，用 5 mL 乙腈 / 水溶液 (5:95, v/v) 溶解，待净化。二、SPE 柱净化
实验材料： Copure® C18，500 mg/6 mL
(1) 活化：C18 固相萃取柱使用前依次使用 5 mL 甲醇和5 mL 水活化。(2) 上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 1 mL/min 的流速过柱，弃去滤液。用 4 mL 乙腈 /水溶液(5:95, v/v)分两次淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干小柱。用8 mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
(3) 重新溶解：洗脱液于 45 ℃氮吹吹干，用 1 mL 乙腈 /水溶液 (2:8, v/v) 定溶，0.22 µm 微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
三、仪器条件
设备：Waters Alliance 2695
色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm)
检测器：Waters 2487 紫外检测器
检测波长：268 nm
流动相：A：水 B：甲醇
洗脱方式：等度洗脱，A: B=40: 60
流速：1.0 mL/min
进样体积：20 µL
四、实验结果
表 1 牛奶基质中氯霉素的 0.5 mg/kg 添加回收结果
图 1 添加水平为 0.5 mg/kg 牛奶基质中氯霉素检测色谱图
五、订购信息
