泡菜、酸菜及腊肠中亚硝酸盐测定（Copure®椰壳活性炭SPE柱）

《GB 5009.33-2025 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 》

第二法 分光光度法

本方法以《GB 5009.33-2025》第二法 分光光度法为参考，优化了样品提取步骤，并选择了泡菜、酸菜和腊肠三种基质做亚硝酸盐加标验证，回收率均在90%以上。

一、 试剂配制

（1）硼酸钠溶液(50 g/L)：称取50g十水硼酸钠（Na₂B₄O₇·10H₂O），加热水溶解，冷却后稀释至1L。

（2）亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取106g三水亚铁氰化钾，加水溶解并定容至1L。

（3）乙酸锌溶液(220 g/L)：称取220g二水乙酸锌，加30mL冰乙酸和约500mL水，加热或超声至完全溶解，冷却后用水定容至1L。

（4）氢氧化钠溶液(10mol/L)：称取40g氢氧化钠于烧杯中，用适量的水溶解，冷却后用水定容至100mL。

（5）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸（C₆H₇NO₃S），溶于100mL盐酸溶液（20%）中，加热或者超声使其溶解，冷却后置于棕色瓶中，2-6℃避光保存。有效期1个月。

（6）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺（C₁₂H₁₄N₂.2HCl），溶于100mL水，置于棕色瓶中，2-6℃避光保存。有效期1个月。

二、样品提取

（1）  称取5g样品于250mL具塞锥形瓶中，加入12.5 mL硼酸钠溶液(50 g/L)，再加入150mL 70℃左右的水，混匀后沸水浴中加热15 min，随后冷却至室温。

（2） 将溶液全部转移至200 mL容量瓶中，加入5 mL亚铁氰化钾溶液(106 g/L)，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液(220 g/L)， 振荡混匀以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，静置 30 min。

（3） 将全部溶液转移至50mL离心管中，以10000 rpm离心10 min，上清液经定量滤纸过滤，弃去前30 mL滤液后收集余下滤液。

（4） 取50mL滤液于50mL离心管中，加入0.8mL氢氧化钠溶液(10mol/L)，振荡混匀（溶液pH 应为 12 ± 0.5）以10000 rpm离心10 min，待净化。

三、净化- Copure®椰壳活性炭SPE柱

（1） 活化：净化柱依次用5 mL甲醇、5 mL一级水

（2） 上样：将上述（4）步骤待净化液上柱（活化或上样过程中尽量避免干柱）

（3） 收集：弃去前5 mL净化液，收集40mL净化液于50mL具塞比色管中，待测定。

四、标准系列工作液

吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液（5.00mg/L），分别置于50mL具塞比色管中，加40mL水，待测定。

五、亚硝酸盐的测定

（1） 往40mL样品净化液（可根据样品含量适当减少吸取净化液体积）和标准系列工作液中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液（4g/L），混匀，静置3-5min，各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液（2g/L），加水定容至50mL刻度线，混匀，静置15min。

（2） 用1cm比色皿，以标准溶液第一点（0.0mg/L亚硝酸钠）调节零点，于波长538nm处测定吸光度，绘制标准曲线。以试剂空白调节零点，测定试样吸光度。

注：（1）上述步骤结束后标准系列工作液浓度为0 ng/mL，20 ng/mL，40 ng/mL，60 ng/mL，80 ng/mL，100 ng/mL，150 ng/mL，200 ng/mL，250ng/mL。

六、仪器条件

仪器：美析 UV-1200

检测波长：538 nm

七、实验结果

表1 样品加标结果

注：测定值依据标准溶液获得线性方程带入测定吸光值换算得出

八、注意事项

（1）本方法在对应标准方法的基础上，增加了过滤纸后“取50mL滤液于50mL离心管中，加入0.8mL氢氧化钠溶液(10mol/L)，振荡混匀（溶液pH 应为 12 ± 0.5）以10000 rpm离心10 min，待净化。”的操作步骤，使溶液 pH 值控制在12±0.5区间。净化前溶液的 pH 值为关键影响因素，直接关系椰壳活性炭 SPE 小柱对目标物的吸附效率与选择性。

（2）处理腊肠基质时，过滤纸后的样液澄清且颜色较浅，但对比SPE 柱净化前后的检测结果及回收率数据，未净化样液的检测结果偏高，推测存在基质干扰。建议腊肠类制品还是进行SPE 柱净化步骤。

九、订货信息