DO Supplement-Ura：用于制备缺尿嘧啶酵母筛选培养基的营养补充物

产品信息

项目	内容
产品名称	DO Supplement-Ura
中文名称	缺尿嘧啶营养补充物
英文名称	Dropout Supplement-Uracil
产品货号	GF914
包装规格	20 g/瓶
储存条件	2～8℃密封保存
运输条件	常温运输
有效期	2 年
产品用途	用于配制 SD/-Ura 等缺尿嘧啶酵母合成培养基，适用于 URA3 标记筛选、酵母转化子筛选、质粒维持、功能互补和营养缺陷型筛选实验

DO Supplement-Ura 的作用原理

酵母合成缺陷型培养基通常由三部分组成：YNB 提供无机氮源、无机盐、维生素和微量元素；葡萄糖或其他糖类提供碳源；Dropout Supplement 提供除目标缺失营养成分以外的氨基酸、腺嘌呤、尿嘧啶等营养补充物。DO Supplement-Ura 的特点是缺少尿嘧啶，其余必要营养成分则用于支持酵母基础生长。

在 SD/-Ura 培养基中，不能合成尿嘧啶的 ura3 缺陷型酵母通常无法正常生长；而携带 URA3 筛选标记、通过质粒补充 URA3 功能，或通过功能互补恢复尿嘧啶合成能力的酵母细胞，可以在缺尿嘧啶条件下形成菌落。因此，DO Supplement-Ura 常用于筛选含 URA3 标记质粒的酵母转化子，也常用于维持含 URA3 质粒的酵母菌株。

需要明确的是，DO Supplement-Ura 不是抗生素、诱导剂或报告基因激活剂。它的作用是配合 YNB 和碳源构建缺尿嘧啶培养环境，通过营养缺陷实现筛选，而不是直接杀灭未转化细胞或直接激活基因表达。

配方组成与用途

成分或组分	用量	主要作用	对培养基用途的贡献
DO Supplement-Ura	按产品标签加入	提供除尿嘧啶外的氨基酸、碱基等营养补充物	构建缺尿嘧啶筛选环境，用于 URA3 标记或尿嘧啶营养缺陷相关筛选
YNB（无氨基酸）	6.7 g/L，常用于酿酒酵母体系	提供硫酸铵、无机盐、维生素和微量元素	构成酵母合成培养基的基础营养体系
葡萄糖	20.0 g/L	提供主要碳源和能源	支持酵母在缺陷型培养基中生长
琼脂	20.0 g/L，仅平板使用	培养基凝固剂	制备 SD/-Ura 固体平板，便于转化子筛选和菌落挑取
pH	常调至约 5.8	维持适宜酵母生长环境	有助于提高培养条件一致性

SD/-Ura 培养基配制示例

以下为常见 SD/-Ura 培养基配方示例。不同规格的 DO Supplement-Ura 推荐用量可能不同，因此实际添加量应以产品标签为准，不建议脱离标签固定套用。

培养基类型	1 L 配方示例	主要用途
SD/-Ura 液体培养基	YNB 6.7 g + 葡萄糖 20.0 g + DO Supplement-Ura 按标签加入，补水至 1 L，pH 调至约 5.8	用于缺尿嘧啶条件下的酵母液体培养、质粒维持和功能筛选
SD/-Ura 平板培养基	YNB 6.7 g + 葡萄糖 20.0 g + DO Supplement-Ura 按标签加入 + 琼脂 20.0 g，补水至 1 L，pH 调至约 5.8	用于酵母转化子筛选、单菌落分离和 URA3 标记质粒筛选
SD/-Ura 与其他缺陷组合	根据实验目的更换为双缺、三缺或四缺 Dropout Supplement	用于多质粒共转化、多营养标记筛选和复杂遗传操作实验

典型应用场景

DO Supplement-Ura 最常见的用途是筛选 URA3 标记相关的酵母转化子。例如，若酵母宿主为 ura3 缺陷型，只有转入携带 URA3 标记质粒的细胞才能在 SD/-Ura 培养基上生长。因此，SD/-Ura 常用于筛选成功获得目标质粒的酵母细胞，也可用于维持含 URA3 标记质粒的菌株。

在酵母遗传操作中，URA3 是常用的营养筛选标记之一。与抗生素筛选不同，URA3 筛选依赖宿主菌株的营养缺陷背景和培养基中尿嘧啶的缺失。如果宿主不是 ura3 缺陷型，或培养基中混入尿嘧啶，SD/-Ura 的筛选效果就会下降，甚至失去选择性。

DO Supplement-Ura 也可用于功能互补实验。例如，将候选基因或带有 URA3 标记的载体导入尿嘧啶合成缺陷酵母中，若目标体系能够恢复相关营养功能，酵母即可在缺尿嘧啶条件下生长。此类实验中，阳性对照、阴性对照和空载体对照非常关键，否则容易将背景生长误判为阳性结果。

使用方法

按产品标签称取适量 DO Supplement-Ura，加入去离子水中，再加入 6.7 g YNB 和 20.0 g 葡萄糖，搅拌溶解后调节 pH 至约 5.8。如需制备平板，再加入 20.0 g 琼脂，补水至 1 L。121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 50℃，可根据需要加入热敏性抗生素或其他添加剂，然后倒入无菌培养皿中，室温凝固后使用。制备好的平板可用封口膜封好后倒置置于 4℃保存。

若配制少于 1 L 的体积，各成分按比例减少即可。例如配制 500 mL SD/-Ura 平板时，YNB、葡萄糖、琼脂和 DO Supplement-Ura 均按 1/2 用量加入。剩余粉剂应及时密封，置于推荐条件下保存，避免反复受潮。

对于普通酵母筛选实验，整体高压灭菌操作简便，且有助于降低污染风险。对于表达调控、碳源敏感或对培养基颜色要求较高的实验，可将葡萄糖单独配制为无菌储备液，过滤除菌后在培养基灭菌并冷却后加入。

灭菌方式与葡萄糖颜色变化

SD 培养基中含有葡萄糖和含氮成分，高温高压灭菌过程中可能发生轻微美拉德反应或糖类热降解，使培养基颜色变深。控制好灭菌温度和时间时，这种轻微颜色变化通常不会明显影响多数酿酒酵母筛选实验。但如果培养基明显变褐、出现焦化气味或异常沉淀，则应检查灭菌条件是否过度。

对于毕赤酵母等对碳源条件较敏感的体系，或涉及表达调控、代谢分析的实验，不建议简单忽略葡萄糖高温处理带来的影响。更稳妥的做法是将 YNB、DO Supplement 和琼脂等基础成分先灭菌，葡萄糖单独过滤除菌后无菌加入冷却后的培养基中，以减少糖热反应对实验背景的干扰。

质量控制与结果观察

使用 DO Supplement-Ura 配制的 SD/-Ura 培养基应具备明确的缺尿嘧啶筛选能力。阳性菌株或携带 URA3 标记的酵母应能在培养基上生长；阴性对照或缺少 URA3 功能的菌株应不生长或明显受限。若阴性对照大量生长，通常提示培养基中可能存在尿嘧啶污染、Dropout 用错、菌株背景不匹配或筛选压力不足。

检查项目	合格表现	可能异常
粉剂状态	干燥、均匀、无严重结块	吸潮、结块、变色、异味
培养基外观	灭菌后均一，无明显异常沉淀	明显褐变、焦化气味、沉淀异常
阳性对照	URA3 阳性或互补阳性菌株可生长	生长弱或不生长，需检查碳源、YNB、pH 或菌株状态
阴性对照	URA3 阴性菌株不生长或明显受限	背景生长高，需检查补充物是否用错、污染或宿主背景不匹配
平板状态	凝固良好，表面平整，无污染	平板失水、开裂、污染或表面水分过多

储存条件与注意事项

DO Supplement-Ura 应于 2～8℃密封保存，避免受潮和长时间暴露于空气中。若产品出现严重吸水、结块、变色或异味，应停止使用，以免影响配制准确性和筛选结果。开封后建议尽快使用，并在取用后立即密封。

本产品仅限专业实验室科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得作为食品、药品或食品加工原料使用，也不应存放于普通住宅内。操作时应穿实验服并佩戴一次性手套。实验结束后的带菌平板、培养物、吸头、离心管和其他污染物应按实验室生物安全要求处理，通常可于 121℃高压灭菌 30 min 后再进行废弃。

小结

DO Supplement-Ura 是用于制备缺尿嘧啶酵母合成培养基的 Dropout 补充物，需与 YNB、葡萄糖或其他碳源配合使用，才能形成 SD/-Ura 等具体培养基。该产品通过缺失尿嘧啶构建选择压力，适用于 URA3 标记质粒筛选、酵母转化子筛选、质粒维持、功能互补、离子耐受和突变体鉴定等实验。使用时应严格按照标签添加，配合正确的 YNB、碳源、pH 和对照菌株，才能获得可靠的筛选结果。