细菌的人工培养程序及常用培养方法详解

前言

细菌培养是微生物学研究、食品安全检测、环境监测、临床检验、生物制药以及培养基研发中的基础技术。无论是进行菌种分离、病原菌检测，还是培养基性能验证，都离不开规范的细菌人工培养过程。

不同种类的细菌对营养条件、温度、氧气浓度以及培养时间的要求各不相同。因此，掌握细菌的人工培养程序和不同培养方式的特点，是获得准确实验结果的重要前提。

本文将系统介绍细菌人工培养的基本流程，以及根据气体需求分类的几种常见培养方法。

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什么是细菌的人工培养？

细菌人工培养是指在实验室条件下，通过人为提供适宜的营养物质、生长环境和培养条件，使细菌生长繁殖并形成可观察菌落的过程。

与自然环境相比，人工培养具有以下优势：

• 可控制培养条件

• 便于观察菌落特征

• 有利于分离纯培养物

• 能进行后续生化鉴定

• 便于保存和扩大培养

现代微生物检测几乎都建立在人工培养技术基础之上。

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细菌人工培养的基本程序

一个完整的细菌培养过程通常包括以下几个步骤。

第一步：标本采集与处理

培养工作的起点是样品（标本）的获取。

常见样品包括：

食品样品

• 乳制品

• 肉制品

• 饮料

• 水产品

• 调味品

环境样品

• 水样

• 空气样

• 表面涂抹样

临床样品

• 咽拭子

• 血液

• 尿液

• 痰液

工业样品

• 发酵液

• 原料

• 中间产品

• 成品

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菌量较少时为什么要增菌？

某些样品中的目标菌数量极少，甚至处于受损状态。

例如：

• 沙门氏菌

• 李斯特菌

• 克罗诺杆菌

• 志贺氏菌

如果直接接种平板，往往难以检出。

因此需要先进行：

预增菌

恢复受损细胞活性。

常见培养基：

• BPW缓冲蛋白胨水

• TSB肉汤

选择性增菌

提高目标菌数量并抑制杂菌。

例如：

• RV培养基（沙门氏菌）

• Fraser肉汤（李斯特菌）

增菌步骤能够显著提高检测灵敏度。

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第二步：接种适宜培养基

获得样品后，应根据培养目的选择适当培养基。

不同培养基承担不同功能。

营养培养基

适用于多数细菌培养。

例如：

• 营养琼脂（NA）

• TSA培养基

• LB培养基

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选择性培养基

用于目标菌筛选。

例如：

沙门氏菌

• XLD琼脂

• HE琼脂

金黄色葡萄球菌

• Baird-Parker琼脂

大肠菌群

• MacConkey琼脂

• VRBA培养基

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鉴别培养基

用于观察代谢特征。

例如：

• TSI培养基

• KIA培养基

• 尿素培养基

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血液培养基

用于观察溶血现象。

典型产品：

• 血琼脂培养基

可用于：

• 链球菌鉴别

• 葡萄球菌观察

• 受损菌复苏

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第三步：提供适宜培养条件

细菌接种完成后，需要给予适宜环境。

影响细菌生长的主要因素包括：

温度

绝大多数医学和食品相关细菌适宜温度为：

35℃～37℃

这是因为许多细菌来源于温血动物，其最适生长温度接近体温。

常见情况：

细菌类型	最适温度
大肠杆菌	37℃
沙门氏菌	37℃
金黄色葡萄球菌	37℃
李斯特菌	35～37℃
假单胞菌	35～37℃

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培养时间

多数细菌培养：

18～24小时

即可形成典型菌落。

但部分细菌需要更长时间：

细菌	培养时间
李斯特菌	24～48h
布鲁菌	48～72h
分枝杆菌	数周

因此培养时间应根据目标菌种确定。

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湿度

培养箱内应保持适当湿度。

湿度不足可能导致：

• 平板干裂

• 菌落生长不良

• 培养基失水

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气体环境

不同细菌对氧气和二氧化碳需求不同。

这也是细菌培养方法分类的重要依据。

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根据气体需求分类的培养方法

一、需氧培养

什么是需氧培养？

需氧培养是指细菌在普通空气环境下进行培养。

空气中约含：

• 氧气 21%

• 氮气 78%

• 二氧化碳 0.04%

对于大多数细菌而言，这样的环境已经足够。

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适用菌种

包括：

• 大肠杆菌

• 铜绿假单胞菌

• 枯草芽孢杆菌

• 金黄色葡萄球菌

• 蜡样芽孢杆菌

以及大部分兼性厌氧菌。

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培养方法

最简单的方法是：

直接放入普通恒温培养箱培养。

这是实验室最常见的培养方式。

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二、厌氧培养

什么是厌氧培养？

厌氧培养是指在完全无游离氧环境下培养细菌。

某些细菌暴露于氧气中不仅不能生长，甚至会迅速死亡。

这些细菌称为：

专性厌氧菌（Obligate Anaerobes）

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常见厌氧菌

例如：

• 产气荚膜梭菌

• 肉毒梭菌

• 破伤风梭菌

• 脆弱拟杆菌

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常见厌氧培养方法

厌氧产气袋法

利用化学反应消耗氧气。

特点：

• 操作方便

• 应用广泛

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厌氧培养罐法

通过催化反应除氧。

适用于：

• 日常检测

• 菌种保存

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厌氧工作站

目前较先进的方法。

特点：

• 氧浓度可精确控制

• 适合严格厌氧菌研究

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三、二氧化碳培养

什么是CO₂培养？

某些细菌在普通空气中生长较差，需要较高浓度二氧化碳。

一般要求：

5%～10% CO₂

环境。

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常见菌种

脑膜炎奈瑟菌

对CO₂依赖明显。

布鲁菌

在CO₂环境中生长更佳。

空肠弯曲菌

需特殊气体环境支持。

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培养方式

常采用：

CO₂培养箱

自动控制：

• 温度

• 湿度

• CO₂浓度

是现代实验室标准配置之一。

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四、微需氧培养

什么是微需氧环境？

微需氧菌既不能在高氧环境中正常生长，也不能完全无氧。

其最适条件通常为：

• 氧气约5%

• 二氧化碳约10%

• 氮气约85%

这种环境称为：

微需氧环境（Microaerophilic Environment）

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常见微需氧菌

包括：

空肠弯曲菌

食品检测中的重要致病菌。

幽门螺杆菌

胃部感染的重要病原菌。

某些螺旋体

也需要微需氧环境。

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培养方法

通常使用：

• 微需氧产气袋

• 微需氧培养罐

• 专用气体混合培养系统

进行培养。

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细菌培养完成后需要做什么？

经过培养后，应对细菌生长情况进行观察。

主要观察内容包括：

菌落形态

观察：

• 大小

• 颜色

• 表面特征

• 边缘形态

• 隆起程度

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生长情况

判断：

• 是否有目标菌生长

• 生长是否符合预期

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挑取可疑菌落

进一步进行：

• 纯化培养

• 革兰氏染色

• 生化鉴定

• 血清学试验

• 分子生物学检测

最终确认菌种身份。

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培养基在细菌培养中的重要作用

细菌培养成功与否，很大程度上取决于培养基质量。

优质培养基应具备：

• 营养成分稳定

• pH准确

• 批次一致性好

• 菌落特征典型

• 选择性和鉴别性明确

对于食品微生物检测、制药微生物控制以及科研实验而言，培养基不仅是细菌生长的载体，更是获得准确结果的重要保证。

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总结

细菌人工培养是微生物检测和研究的基础技术，其标准流程包括：

1. 样品采集与处理

2. 增菌（必要时）

3. 接种适宜培养基

4. 提供适宜培养条件

5. 观察菌落生长

6. 分离与鉴定

根据细菌对氧气的需求，又可分为：

• 需氧培养

• 厌氧培养

• 二氧化碳培养

• 微需氧培养

不同菌种需要不同的培养环境，正确选择培养方法和培养基，是获得可靠实验结果的关键。

作为专业微生物培养基研发与生产企业，逗点生物将持续分享培养基应用、微生物检测技术和实验室操作知识，为食品、环境、制药及生命科学领域用户提供专业技术支持。