GB 4789.38-2025大肠埃希氏菌检验标准更新解读

大肠埃希氏菌是食品微生物检验中重要的卫生指示菌之一，也可作为粪便污染和加工卫生状况的参考指标。GB 4789.38-2025《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数》对原2012版标准进行了较大修订，主要变化集中在检验原理、鉴定依据、培养基选择、MPN计数法、平板计数法和结果报告等方面。

总体来看，新版标准的核心思路，是用更直观、更便于操作的β-葡萄糖醛酸苷酶显色反应，替代过去较繁琐的IMViC生化鉴定流程，使大肠埃希氏菌计数方法更加简化和标准化。

一、术语和检验原理的变化

旧版标准中，大肠埃希氏菌的判定主要依赖IMViC试验，即靛基质、甲基红、VP和柠檬酸盐利用试验。典型大肠埃希氏菌通常表现为“++--”，部分菌株可表现为“-+--”。这种方法虽然经典，但操作步骤较多，鉴定周期较长，对人员经验和结果判读要求也较高。

新版标准改为以β-葡萄糖醛酸苷酶活性作为重要检验原理。绝大多数大肠埃希氏菌具有β-葡萄糖醛酸苷酶，可分解TBX琼脂中的5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷，形成蓝绿色菌落。因此，在TBX琼脂上形成蓝绿色菌落成为新版方法中筛选和计数大肠埃希氏菌的重要依据。

这一变化使鉴定过程更加直观，减少了转接、纯化和多项生化反应的时间。但需要注意，β-葡萄糖醛酸苷酶并不是所有大肠埃希氏菌均具备的特征。例如，大肠埃希氏菌O157等部分菌株通常缺乏该酶活性，在TBX琼脂上可能不形成典型蓝绿色菌落，存在漏检风险。另一方面，肠杆菌科中少数志贺氏菌、沙门氏菌等也可能具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，在TBX上形成类似蓝绿色菌落。因此，新版方法更适用于食品中大肠埃希氏菌计数，而不应直接等同于所有致病性大肠埃希氏菌的检出方法。

二、LST和EC肉汤培养时间调整

新版标准对LST和EC肉汤的培养时间进行了优化。旧版标准中相关培养时间通常为48小时，新版调整为24～48小时。也就是说，在24小时观察时若已经出现产气阳性结果，即可进行后续步骤，不必机械等待至48小时。

这一调整有助于缩短阳性样品的检验周期，提高实验室检测效率。对于产气明显、目标菌活性较强的样品，检测时间可明显缩短；而对于目标菌数量较低、受损较重或产气较慢的样品，仍可继续培养至48小时后再观察。这样的时间设置兼顾了效率和检出率。

三、鉴定方法由IMViC转向TBX显色确认

旧版方法中，EC肉汤出现产气后，需要转接伊红美蓝琼脂，即EMB平板，再接种营养琼脂纯化，随后进行IMViC生化试验和革兰氏染色鉴定。整个过程通常还需约3天，步骤较多，且操作链条较长。

新版标准简化了这一流程。对于出现阳性反应的培养物，可直接划线接种TBX琼脂进行鉴定。TBX琼脂利用β-葡萄糖醛酸苷酶显色反应，使大肠埃希氏菌形成蓝绿色菌落，检验人员可更直观地进行观察和计数。

这种调整的优势在于缩短时间、减少操作步骤、降低转接过程中污染或误判的风险。但在实际应用中，仍应注意TBX蓝绿色菌落是基于酶活性的筛选结果，并非适用于所有大肠埃希氏菌类型。对于特殊样品、疑似致病性菌株或结果存在争议的情况，可结合其他鉴定方法进一步确认。

四、贝类产品MPN计数法调整

新版标准对贝类及其产品的MPN计数法进行了单独强化。对于贝类产品，由原来每个稀释度接种3管，调整为每个稀释度接种5管，总计15管。相比9管法，15管法在低水平污染样品中具有更好的统计灵敏度和准确性。

贝类产品常见背景菌复杂，且目标菌含量可能较低，采用更多平行管数有助于降低随机误差，提高结果可信度。新版标准还新增附录C，用于贝类产品MPN结果查表，便于实验室按照对应管数组合进行结果换算和报告。

需要注意的是，贝类产品的平板计数法并不适用，应按标准选择相应的MPN计数流程。实验室在样品分类时应准确判断“贝类及其产品”的适用范围，避免误用方法。

五、TBX琼脂替代VRBA-MUG平板

旧版平板计数法中可使用VRBA-MUG平板。VRBA-MUG同样利用大肠埃希氏菌β-葡萄糖醛酸苷酶分解MUG底物产生荧光反应，但实际操作时需要借助紫外灯观察。部分样品基质本身可能存在荧光干扰，或者平板菌落较多、菌落混杂时荧光边界不清，给计数带来困难。

新版标准采用TBX琼脂后，观察方式更直接。大肠埃希氏菌在TBX上通常形成蓝绿色菌落，不需要紫外灯辅助，计数便利性更高，受样品荧光背景干扰的可能性也更低。对于实验室日常批量检测而言，TBX琼脂在操作简便性和结果判读一致性方面更有优势。

不过，TBX的选择和显色效果仍受培养基质量影响。优质TBX琼脂应能支持大肠埃希氏菌良好生长，并使其形成清晰、易识别的蓝绿色菌落，同时对非目标菌具有一定抑制或区分能力。实验室应做好培养基质控和典型菌株验证。

六、平板计数范围和结果报告变化

新版标准将平板计数法中可用于计数的菌落范围由旧版的10～100 CFU调整为15～150 CFU。计数范围扩大后，可减少部分样品重复检测或因计数范围不合适导致结果不可用的情况，同时也更符合平板计数统计学要求。

新版标准还对结果计算和报告作出更详细说明，包括数值修约、报告单位和不同结果情形下的表述方式。对于实验室而言，这有助于减少报告格式不统一、修约不一致和低于检出限结果表达不规范等问题。

在实际报告中，应根据样品类型、检测方法、稀释倍数、接种体积和可计数平板情况进行计算。对于MPN法，应按对应管数和阳性组合查表；对于平板计数法，应按TBX蓝绿色菌落数和标准规定公式换算为CFU/g或CFU/mL。

七、实验室执行新版标准的注意事项

新版标准实施后，实验室应同步更新SOP、原始记录、培养基清单、质控方案和报告模板。尤其要注意LST、EC肉汤、TBX琼脂、磷酸盐缓冲液等培养基和试剂的配方、用途及质控要求。

对于从旧版方法切换到新版方法的实验室，建议重点验证TBX琼脂的促生长能力、显色清晰度和非目标菌干扰情况。质控菌株可选择典型大肠埃希氏菌作为阳性对照，同时结合阴性或非目标菌株观察选择性和区分能力。若样品背景菌复杂，需特别注意蓝绿色可疑菌落是否存在假阳性风险。

此外，实验室人员应理解新版方法的适用边界。GB 4789.38-2025的目标是食品中大肠埃希氏菌计数，并非专门用于产志贺毒素大肠埃希氏菌、大肠埃希氏菌O157或其他致病型大肠埃希氏菌的专项检测。对于致病性大肠埃希氏菌风险评估，应采用相应的专项标准或经验证方法。

八、小结

GB 4789.38-2025对大肠埃希氏菌计数方法进行了系统优化。新版标准以β-葡萄糖醛酸苷酶活性和TBX显色反应作为核心鉴定依据，减少了传统IMViC鉴定流程，缩短了检测周期，提高了操作便利性。LST和EC肉汤培养时间由固定48小时调整为24～48小时，使阳性样品可更快进入后续确认。贝类产品MPN法改为15管体系，并新增结果查表附录，提高了低水平污染样品的计数可靠性。

对于食品微生物实验室而言，新版标准的重点不只是“换用TBX琼脂”，更是检测思路从传统生化鉴定向显色酶反应确认转变。规范理解适用范围、培养基性能和结果报告要求，是准确执行GB 4789.38-2025的关键。