商品化培养基和试剂的质量控制测试方法：GB 4789.28-2013流程解读

商品化培养基和试剂在食品微生物检验中应用广泛，包括脱水培养基、即用型平板、试管培养基、选择性添加剂、生化鉴定试剂等。虽然商品化产品通常已经由生产商完成基础质量控制，但实验室在接收、配制或使用前，仍需根据标准要求进行必要的验收和性能确认。培养基是否合格，不能只看外观、批号和有效期，还要看它是否能支持目标菌生长、抑制非目标菌，并呈现正确的鉴别反应。

GB 4789.28-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中，对实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制测试方法进行了规定，包括非选择性固体培养基、选择性固体培养基、液体增菌培养基、悬浮培养基、运输培养基、Mueller-Hinton血琼脂、鉴定培养基和实验试剂等。需要注意的是，该标准现已被GB 4789.28-2024代替，实际检测和质控应以现行有效标准为准。本文主要对旧版方法思路进行科普解读，帮助理解培养基性能测试的基本逻辑。

一、为什么商品化培养基也要做质量控制？

商品化培养基并不等于可以直接无条件使用。运输温度、储存条件、开封后吸湿、配制过程、灭菌条件、添加剂加入温度、平板保存时间等，都可能影响培养基性能。对于食品微生物检验来说，培养基质量问题可能导致目标菌漏检、非目标菌过度生长、菌落颜色异常、生化反应不清或结果不可重复。

培养基质量控制的核心不是“看起来正常”，而是用规定的测试菌株验证其实际功能。

二、非选择性分离和计数固体培养基：半定量划线法

非选择性分离和计数固体培养基主要用于支持目标菌生长，如平板计数琼脂、营养琼脂、胰酪大豆胨琼脂等。旧版标准中常采用半定量划线法评价其促生长能力。

工作菌悬液通常由标准储备菌株接种至非选择性肉汤中过夜培养获得。测试时使用1 μL接种环进行平板划线，同时接种两个平板。划线可分为A、B、C、D四个区域：A区按约0.5 cm间隔划4条平行线，B区和C区同样划线，D区划一条连续曲线。培养后根据各区菌落生长情况计算生长指数G。

该方法属于半定量评价，重点是判断培养基是否支持目标菌形成良好、典型的生长表现。

三、半定量划线法的操作细节

半定量划线法看似简单，但对接种环、接种量、划线角度和操作速度要求较高。接种环应充分接触菌悬液，取一满环接种物后，可将接种环轻触容器边缘3次，以去除多余液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度宜保持约20°～30°，压力和速度应前后一致，整个划线过程应快速、连续。

移取液体培养物时，接种环应伸入培养液下部，避免环上产生气泡或泡沫。通常用同一个接种环完成A～D区划线，操作过程中不需要对接种环灭菌；但若需要获得较低的生长指数G，或方法要求降低携带量，则可在不同区域之间更换接种环或进行灭菌。

因此，半定量测试方法需要操作者保持稳定手法，并使用一致的平板状态和培养条件。

四、生长指数G如何计算？

培养后，观察每条划线上的菌落生长情况，并计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线记为1；若仅一半划线有稠密菌落生长，可记为0.5；若划线上没有菌落生长、生长量少于划线一半，或菌落生长微弱，则记为0。每个培养皿的G值为各线得分总和，最大值为16。

例如，若A区和B区全部划线均有良好生长，共8条线计8分；C区4条线均只有约一半长度有稠密生长，每条计0.5分，则C区共2分；此时G值为10。目标菌在培养基上应呈现典型生长，G值大于或等于6时，旧版方法中可认为该培养基可接受。非选择性培养基的G值通常较高。

五、选择性固体培养基：既看目标菌，也看非目标菌

选择性分离和计数固体培养基的质量控制不能只检测目标菌是否生长，还必须检测非目标菌是否受到适当抑制。目标菌半定量测试可按非选择性固体培养基的方法进行；非目标菌则用于评价选择性，即培养基是否能抑制或限制干扰菌生长。

选择性培养基最容易出现的问题是“抑制过强”或“抑制不足”。抑制过强会导致目标菌生长率低，甚至漏检；抑制不足则会导致背景菌大量生长，影响目标菌分离和判读。

六、液体增菌培养基和液体计数培养基：定性测试方法

非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基，可采用定性测试方法评价。通常将培养基分装试管，每管10 mL。工作菌悬液可由标准储备菌株接种非选择性肉汤过夜培养后，进行10倍系列稀释至10⁻³，或采用其他方法制备成约10⁵ CFU/mL～10⁷ CFU/mL的菌悬液。

测试时，用1 μL接种环取一环工作菌悬液，直接接种至待测液体培养基中，按规定温度和时间培养。培养后通过浊度、沉淀、产气或其他典型反应进行评价。

七、液体培养基的结果判读

旧版方法中，液体培养基可用目测浊度值0～2进行评价：0表示无混浊，1表示很轻微混浊，2表示严重混浊。目标菌的浊度值应为2，说明培养基能支持目标菌明显生长；非目标菌的浊度值应为0或1，说明其受到抑制或生长较弱。

有时微生物生长后会聚集成细胞团，并沉积在试管或瓶底。遇到这种情况，应小心振荡试管，使沉积物分散后再观察。对于选择性液体计数培养基，目标菌还应出现产气现象，而非目标菌不应产气。若只有轻微浊度但无典型反应，应结合培养基用途和标准要求谨慎判断。

八、悬浮培养基和运输培养基：看“能否维持目标菌”

悬浮培养基和运输培养基的作用不是促进微生物大量增殖，而是在规定时间和条件下维持目标菌存活，并尽量不改变样品中微生物状态。因此，其质量控制重点是目标菌接触培养基前后是否仍能良好生长。

测试时，用1 μL接种环取一环工作菌悬液，接种至装有待测培养基的试管中并混匀。随后立即用10 μL接种环取一环培养物，划平行线接种到适宜平板上，按标准规定条件培养。剩余已接种菌液的待测培养基置20 ℃～25 ℃放置45 min后，再次用10 μL接种环取样划线接种平板并培养。若待测培养基有特殊保存条件，则应按相应质量控制要求处理后再进行划线接种。

结果要求是接种前后平板上目标菌生长情况均应良好。若45 min后目标菌明显减少或生长变差，说明该悬浮或运输培养基可能对目标菌不够友好，或保存条件不适合。

九、Mueller-Hinton血琼脂、鉴定培养基和试剂的测试

Mueller-Hinton血琼脂常用于苛养菌药敏试验相关场景，其质量控制不仅要关注促生长能力，还要关注药敏试验结果是否稳定、抑菌圈是否符合质控范围。鉴定培养基则应验证目标菌是否出现正确反应，非目标菌是否呈现阴性或不同反应。实验试剂应验证其灵敏度、特异性和有效性，如染色液、氧化酶试剂、凝固酶试剂、靛基质试剂等。

这些材料虽然不一定都属于“培养基”，但都会影响最终微生物检验结果，因此应纳入实验室质量控制体系。

十、商品化培养基验收的记录要求

实验室进行商品化培养基和试剂质量控制时，应保存完整记录。记录内容不仅包括结果合格或不合格，还应包括批号、有效期、储存条件、测试菌株、接种方式、培养条件、结果判读和操作人员等信息。

完整记录有助于发现批次问题、保存条件问题或操作偏差，也便于后续审核和质量追溯。

十一、常见问题与控制建议

小结

实验室使用商品化培养基和试剂时，应进行必要的质量控制测试。非选择性固体培养基主要评价目标菌促生长能力，可用半定量划线法计算生长指数G；选择性固体培养基既要测试目标菌生长，也要测试非目标菌抑制情况；液体增菌培养基和选择性液体计数培养基可通过浊度、产气或典型反应进行定性评价；悬浮培养基和运输培养基则应验证目标菌在接触前后是否仍能良好生长。

培养基和试剂质量控制的目的，是确认它们在实验室实际使用条件下仍能发挥预期功能。GB 4789.28-2013中的方法对理解商品化培养基验收具有参考意义，但实际检测应以GB 4789.28-2024等现行有效标准和最新勘误文本为准。对于逗点生物等培养基生产和使用场景，稳定的促生长能力、选择性、鉴别性和批间一致性，是保证微生物检验结果可靠的关键。