D/E 中和琼脂：卫生环境表面微生物计数与分离培养的中和型培养基

产品基本信息

成分	用量（g/L）	主要作用	用途说明
胰酪胨	5.0	提供氮源、氨基酸和短肽	为环境微生物恢复和生长提供基础营养
酵母膏粉	2.5	提供 B 族维生素、生长因子和可利用氮源	促进受损或低水平微生物恢复生长
葡萄糖	10.0	可发酵碳源	供微生物利用产酸，并配合溴甲酚紫显示生长代谢反应
巯基乙醇酸钠	1.0	还原性中和剂	常用于中和汞类等重金属消毒剂，也可降低培养体系氧化还原压力
硫代硫酸钠	6.0	还原性中和剂	可中和碘类、氯类等氧化性消毒剂残留
亚硫酸氢钠	2.5	还原性中和剂	可中和醛类等消毒剂残留，降低其持续抑菌作用
卵磷脂	7.0	表面活性中和剂	主要用于中和季铵盐类消毒剂
吐温-80	5.0，需另加	非离子表面活性剂	常用于中和酚类及部分表面活性类消毒剂，同时改善样品中微生物分散
溴甲酚紫	0.2	pH 指示剂	葡萄糖发酵产酸时可由紫色变为黄色，用于辅助观察微生物代谢生长
琼脂粉	15.0	凝固剂	形成固体平板，便于环境表面微生物计数、分离和观察
最终 pH（25℃）	7.6 ± 0.2	提供适宜培养和中和反应环境	有利于中和体系稳定及环境微生物恢复生长

D/E 中和琼脂的核心作用是“中和残留消毒剂 + 支持微生物恢复生长”。在环境表面微生物检测中，采样位置往往经历过清洁和消毒处理。若样品中的残留消毒剂未被及时中和，即使采样时表面仍存在活菌，也可能在采样、转运或培养初期继续受到抑制，导致计数结果偏低。

培养基中的硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和巯基乙醇酸钠具有还原性，可分别用于中和氧化性消毒剂、醛类消毒剂和部分重金属类抑菌物质。卵磷脂和吐温-80则主要用于中和季铵盐、酚类及部分表面活性类消毒剂。多种中和剂配合使用，可提高对复杂消毒剂残留的覆盖能力。

另一方面，D/E 中和琼脂含有胰酪胨、酵母膏粉和葡萄糖，可为微生物提供基础营养。部分微生物利用葡萄糖产酸后，可使溴甲酚紫由紫色转为黄色，因此黄色菌落通常提示该菌具有葡萄糖利用产酸能力。但并非所有环境微生物都会使培养基明显变黄，因此结果判读仍应以菌落形成和计数为主，颜色变化作为辅助观察指标。

称取本品 49.0 g，另取 吐温-80 5 g，混匀后加入蒸馏水或去离子水 1 L，加热搅拌至完全溶解，分装后于 121℃高压灭菌 15 min。灭菌后冷却至约 45～50℃，在无菌条件下倾注平板备用。

配制时应注意吐温-80黏度较高，可先与少量温水或培养基混匀后再加入整体体系，以减少局部浓度不均。灭菌后的培养基应颜色均匀，无污染、异常沉淀或明显分层。倾注平板时应避免产生过多气泡，以免影响菌落计数。

D/E 中和琼脂主要用于卫生环境表面微生物计数和分离培养，适合用于清洁消毒后环境表面、设备表面、生产区域、操作台、墙面、地面及其他可能存在消毒剂残留的采样点。

与普通营养琼脂相比，D/E 中和琼脂更适合处理含消毒剂残留的样品。它可减少残留消毒剂对微生物恢复生长的影响，提高环境监测结果的可靠性。但需要注意的是，D/E 中和琼脂并非选择性培养基，不能用于直接鉴别某一特定菌种。若检测中出现异常菌落，应进一步进行纯化、鉴定和污染溯源分析。

下列质控菌株接种后，于 35～37℃培养 40～48 h，观察生长情况和菌落特征。

PR 值用于评价培养基对质控菌株的促生长能力。大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌等可发酵葡萄糖产酸的菌株，常表现为黄色菌落；铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌在该体系中可表现为紫色菌落。若质控菌株生长率偏低，应检查培养基称量、吐温-80添加量、溶解情况、灭菌条件、pH、平板储存状态以及菌株活性。

D/E 中和琼脂用于环境表面微生物检测时，应根据采样场景选择合适的采样工具和检测流程。若样品中消毒剂浓度过高，超过培养基中和能力，仍可能抑制微生物生长，因此在方法确认中应进行中和有效性验证和中和剂毒性验证。

该培养基含有多种中和剂和卵磷脂、吐温-80等成分，培养基外观和菌落周围颜色可能与普通营养琼脂不同。结果判读时应以菌落数和菌落形态为主，颜色变化作为辅助指标。平板若出现污染、干裂、明显析水、颜色异常或表面不平，不宜用于正式检测。

干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，避免吸潮结块或成分降解。配制和倾注平板时应严格执行无菌操作，制备好的平板应按实验室验证条件储存，并在规定有效期内使用。

总体而言，D/E 中和琼脂是一种适用于卫生环境表面微生物计数和分离培养的中和型培养基。它通过多种中和剂降低残留消毒剂影响，同时提供基础营养支持微生物恢复生长，特别适合用于清洁消毒后环境表面的微生物监测。