明胶培养基：用于细菌明胶液化试验的生化鉴别培养基

产品信息与用途

配方组成及作用

检验原理

明胶液化试验的核心是检测细菌是否能产生胞外明胶酶。明胶在低温下具有凝胶特性，正常未被水解时，冷藏后会形成固态或半固态胶体。若细菌分泌明胶酶，将明胶水解为较小的多肽或氨基酸，明胶的胶凝结构被破坏，即使在2～8℃条件下也不能重新凝固。

铜绿假单胞菌等部分细菌可产生明胶酶，因此接种培养后，经冷藏仍保持液态，判定为阳性。大肠埃希氏菌通常不产生足够明胶酶，培养后经冷藏可重新凝固，判定为阴性。该试验属于生化鉴别项目，结果应结合氧化酶试验、色素产生、生长特征及其他生化反应综合分析，不能单独作为菌种确证依据。

使用方法

称取本品68.5 g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管高层，于115℃高压灭菌20 min。灭菌后将试管垂直放置，待培养基凝固后备用。

使用时通常采用穿刺接种方式，将待检菌接种至明胶培养基高层中，于36±1℃培养24 h。培养结束后，将试管置于2～8℃冷藏，使未被水解的明胶重新凝固，再进行结果判读。若冷藏后培养基仍为液态，判为明胶液化阳性；若冷藏后呈固态，判为阴性。

配制时应确保明胶完全溶解，避免局部凝固不均。灭菌温度不宜随意升高，灭菌时间也不宜过度延长，以免影响明胶凝胶性能。灭菌后若培养基不能正常凝固、出现明显沉淀、污染、异味或pH明显偏离，应停止使用。

质量控制

按标签方法制备培养基后，接种质控菌株，于36±1℃培养24 h，再置2～8℃冷藏后观察结果。

铜绿假单胞菌作为阳性对照，应能水解明胶，使培养基在冷藏后仍保持液态。大肠埃希氏菌作为阴性对照，应不液化明胶，冷藏后培养基重新凝固。若阳性菌株不液化，应检查菌株活性、培养时间、培养温度、培养基灭菌条件和明胶质量。若阴性菌株出现液化，应排查污染、接种量过大、培养时间过长、培养基凝固性能异常或冷藏时间不足等因素。

判读要点与常见误区

明胶培养基的判读必须经过低温复凝步骤。由于明胶在35～37℃培养条件下可能自然融化，培养后直接观察为液态并不能说明明胶酶阳性。只有在2～8℃冷藏后仍不能凝固，才可判定为明胶液化阳性。

判读时应设置未接种空白管作为凝固对照。若空白管在冷藏后也不能凝固，说明培养基明胶凝固性能异常，本批试验结果无效，应重新制备培养基。若试管上层部分液化、下层仍凝固，应结合培养时间和接种部位判断，可按方法要求延长培养或复试。

明胶液化反应受菌株、培养时间、明胶浓度和温度影响较大。某些弱阳性菌株可能需要更长培养时间才能出现明显液化；但延长培养应遵循标准方法或实验室受控程序，避免因培养过久造成非特异性变化。

操作与储存注意事项

本品不得用于临床检验。干粉培养基称量时应注意粉尘防护，建议佩戴口罩，避免吸入粉尘引起呼吸道不适。干粉培养基使用后应立即密封，置于避光、干燥处保存，防止吸潮结块。未开封产品在规定条件下保质期为三年；开封后受环境湿度、密封状态和取用频次影响，保质时间可能缩短，应根据实际保存状态评估。

制备好的明胶培养基应垂直放置，使其形成稳定高层。使用前应检查是否凝固良好、是否污染、是否脱水或有异常气泡。检测结束后的带菌试管、接种针及其他污染物，应按实验室生物安全要求处理，建议经121℃高压灭菌30 min后再废弃。