三糖铁琼脂（TSI）：沙门氏菌等肠道革兰氏阴性杆菌鉴定中的经典生化培养基

产品信息

培养基配方

检验原理

TSI 的核心原理是通过 三种糖发酵、产气和硫化氢反应 综合判断细菌的生化特征。培养基中含有葡萄糖、乳糖和蔗糖，其中葡萄糖浓度较低，乳糖和蔗糖浓度较高。不同细菌对这三种糖的利用能力不同，因此会在斜面和高层部分形成不同颜色变化。

酚红是培养基中的酸碱指示剂。细菌发酵糖类产酸时，培养基变黄，记为 A；若细菌利用蛋白胨产生碱性代谢产物，培养基变红，记为 K。由于斜面部分接触氧气较多，而高层底部相对缺氧，同一菌株在斜面和高层中可能表现出不同反应。

只能发酵葡萄糖的细菌，早期可使斜面和高层均变黄；但由于葡萄糖含量较低，斜面部分产生的少量酸会被氧化，同时细菌利用蛋白胨产生碱性物质，使斜面重新变红，而高层因相对厌氧，仍保持黄色，表现为 K/A。沙门氏菌和志贺氏菌常见这类反应。

能够发酵乳糖或蔗糖的细菌会产生较多酸，使斜面和高层均保持黄色，表现为 A/A。大肠埃希氏菌通常表现为 A/A，并可伴随产气。

不发酵糖类的细菌不能利用培养基中的糖产酸，主要利用蛋白胨产生碱性反应，斜面和高层可表现为 K/K 或接近不变。铜绿假单胞菌等非发酵型革兰氏阴性杆菌常见此类反应。

硫化氢与产气反应

TSI 还可用于观察硫化氢和气体产生。部分细菌可还原硫代硫酸钠或代谢含硫化合物，产生硫化氢。硫化氢与硫酸亚铁铵中的铁离子反应，生成黑色硫化铁沉淀，因此培养基变黑提示 H₂S 阳性。

产气反应通常表现为高层琼脂中出现气泡、裂隙、琼脂上冲，严重时可见培养基被顶裂或整体移位。产气结果应结合培养时间和菌株特性判断，不能将操作过程中的机械裂缝误判为产气。

需要注意的是，若高层底部大量变黑，黑色沉淀可能掩盖黄色酸性反应。此时通常仍应理解为高层产酸，即按 K/A，H₂S阳性 判读，而不是简单认为底部“无颜色变化”。

使用方法

称取本品 63.4 g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，于 115℃高压灭菌15 min 后，制成高层斜面备用。

制备高层斜面时，装量和斜面角度要适宜。斜面过长或高层过浅，会影响斜面与高层的氧气差异，进而影响 K/A、A/A 或 K/K 判读；高层过深则可能影响穿刺操作和反应观察。制备完成后，培养基应颜色均一、无污染、无明显气泡、无裂纹和异常沉淀。

接种时应挑取新鲜纯培养物，用接种针先垂直穿刺高层至接近管底，再沿原路退出，并在斜面表面划线。这样的接种方式可同时观察高层相对厌氧环境中的糖发酵、产气和硫化氢反应，以及斜面有氧环境中的糖利用和蛋白胨代谢反应。

质量控制

接种下列质控菌株后，于 36℃±1℃需氧培养24 h，观察结果。若标准或实验室SOP另有要求，可按规定延长观察，但发布和记录中应避免出现“24 h”和“48 h”混杂不清的表述。

注：A 表示产酸，培养基变黄；K 表示产碱，培养基变红。结果通常按“斜面/高层”顺序记录，例如 K/A 表示斜面产碱、高层产酸。

典型反应判读

TSI 的结果判读应综合观察斜面颜色、高层颜色、产气和黑色沉淀。常见判读方式如下：

TSI 结果只是细菌鉴定的一部分。沙门氏菌常见 K/A、H₂S阳性，可产气；志贺氏菌多为 K/A、不产气、不产硫化氢；大肠埃希氏菌多为 A/A、产气、不产硫化氢。但不同菌株可能存在非典型反应，实际判定应结合赖氨酸脱羧酶、尿素酶、靛基质、氧化酶、血清学或分子方法等后续鉴定结果。

常见问题与控制建议

若斜面和高层颜色不典型，应首先检查接种方式是否正确。TSI 必须采用“高层穿刺+斜面划线”的方式，若只划线不穿刺，就无法准确观察高层反应、产气和硫化氢；若穿刺偏斜或未接近管底，也可能影响高层结果。

若培养时间过长，斜面可能因蛋白胨利用而进一步碱化，导致结果偏向红色；若培养时间过短，则糖发酵或硫化氢反应可能不充分。因此，应按规定时间观察并记录结果。质控结果异常时，应检查培养基配制量、pH、灭菌条件、斜面制备状态、菌株活力和培养箱温度。

若H₂S反应过强导致底部颜色难以辨认，应结合黑色沉淀部位和斜面颜色综合判断。若培养基出现干裂、气泡过多、颜色异常或污染，应停止使用。

干粉产品应密封、避光、干燥保存，防止吸潮结块。制备后的TSI斜面应按实验室SOP保存，并在经验证的有效期内使用。使用前应检查斜面是否完整、高层是否有裂缝、颜色是否正常、是否存在污染或失水。

总结

三糖铁琼脂（TSI）是一种用于肠杆菌科及相关革兰氏阴性杆菌生化鉴定的经典培养基。其通过葡萄糖、乳糖和蔗糖观察糖发酵反应，以酚红显示酸碱变化，并利用硫代硫酸钠和硫酸亚铁铵检测硫化氢生成，同时还可观察产气情况。

本产品按 63.4 g/L 配制，采用 115℃高压灭菌15 min，制成高层斜面使用。质量控制中，大肠埃希氏菌应表现为 A/A、产气、不产硫化氢；肠炎沙门氏菌应表现为 K/A、产气、产硫化氢；福氏志贺氏菌应表现为 K/A、不产气、不产硫化氢；铜绿假单胞菌应表现为 K/K、不产气、不产硫化氢。只有在配方、制备、接种、培养和判读均规范的情况下，TSI 才能为沙门氏菌等肠道细菌的鉴定提供可靠的生化依据。