常见弧菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

弧菌是一类常见于水体、海产品和水产养殖环境中的革兰氏阴性弯曲杆菌，其中副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等与食品安全和公共卫生关系密切。在微生物检验中，弧菌的分离通常需要使用选择性培养基。不同弧菌在不同选择性平板上的菌落颜色、大小、透明度和质地存在差异，这些特征可为初筛和挑取可疑菌落提供重要依据。

需要注意的是，选择性平板上的菌落特征只能作为初步判断，不能单独作为最终鉴定依据。弧菌之间存在表型相似、培养基反应交叉和菌株差异，因此应从选择性平板上挑取典型或可疑菌落，继续进行氧化酶试验、嗜盐性试验、生化鉴定、血清学试验或分子检测等确认。

一、TCBS 琼脂：弧菌分离中最常用的选择性平板

TCBS 琼脂全称为硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂，是弧菌分离中应用最广泛的选择性培养基之一。其配方中含有胆盐、柠檬酸盐和较高 pH，可抑制多数非弧菌类杂菌；蔗糖和 pH 指示剂则用于观察菌株是否发酵蔗糖。

在 TCBS 平板上，能发酵蔗糖的弧菌通常形成黄色菌落，不能发酵蔗糖或发酵较弱的弧菌多形成绿色或蓝绿色菌落。因此，菌落颜色是 TCBS 平板上最重要的观察指标之一。

常见表现如下：

从表中可以看出，TCBS 对弧菌具有较好的选择性，但鉴别能力有限。例如，霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌均可表现为黄色菌落；创伤弧菌和副溶血弧菌均可表现为绿色菌落。因此，不能仅凭黄色或绿色就判断具体菌种。

二、菌落颜色背后的原理

TCBS 中的蔗糖是重要鉴别底物。能够利用蔗糖产酸的菌株，会使菌落周围 pH 下降，指示剂变化后表现为黄色菌落；不能发酵蔗糖或产酸不明显的菌株，则通常保持绿色或蓝绿色。

霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌多表现为蔗糖阳性，因此常见黄色菌落；副溶血弧菌通常蔗糖阴性，因此多呈绿色菌落。创伤弧菌在 TCBS 上也常呈绿色至蓝绿色菌落，但不同菌株和培养条件下可能有一定差异。

菌落颜色还会受到培养时间、接种量、培养基批次、平板厚度、样品背景菌群和培养温度影响。培养时间过长时，菌落颜色可能加深或扩散，平板背景也可能发生变化，因此应在标准规定时间内观察并挑取菌落。

三、弧菌显色培养基的辅助作用

弧菌显色培养基是近年来常用的辅助分离培养基。它通过特定酶底物反应，使不同弧菌形成不同颜色菌落，从而提高初筛效率。对于副溶血弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌和溶藻弧菌等，显色培养基常能提供比 TCBS 更直观的菌落颜色差异。

不过，显色培养基并非对所有弧菌都同样适用。原始资料中特别提示：前四种弧菌可选择弧菌显色培养基进行选择性分离，但 河弧菌仍建议使用 TCBS，因为部分显色培养基对河弧菌的分离或显色效果不佳。实际工作中，应根据检测目标菌、标准方法和培养基验证结果选择合适平板。

不同厂家显色培养基的底物体系和菌落颜色可能不同，不能把某一种商品培养基的颜色规则直接套用到所有产品上。使用时应以产品说明书、质控菌株表现和实验室验证结果为准。

四、4 号琼脂与霍乱弧菌可疑菌落

4 号琼脂在部分弧菌检测资料中用于霍乱弧菌等目标菌的选择性分离。根据原始资料整理，霍乱弧菌在 4 号琼脂上可形成圆形、半透明、表面光滑的无色菌落，菌落中心常呈灰色或灰黑色，并可随培养时间延长而加深。

这一特征可作为挑取霍乱弧菌可疑菌落的参考，但仍需进一步确认。因为选择性平板上的灰黑色中心、透明度和菌落大小都可能受培养基状态、培养时间和其他杂菌干扰影响。对于疑似霍乱弧菌菌落，应继续进行氧化酶试验、血清凝集、生化鉴定或分子检测，不应仅凭平板形态下结论。

五、选择性平板上的常见观察要点

观察弧菌选择性平板时，应重点记录菌落颜色、大小、透明度、表面光滑程度、边缘状态、中心颜色、菌落质地以及是否有扩散或黏性。对于弧菌而言，颜色和透明度很重要，但菌落质地同样有参考价值。例如部分副溶血弧菌在 TCBS 上用接种环轻触时，可表现出类似“口香糖”的黏性或拉丝感。

挑取菌落时，不应只挑最典型的一个菌落。由于样品中可能存在多种弧菌或伴随菌，建议从每种选择性平板上分别挑取 3～5 个典型或可疑菌落 进行下一步确认试验。这样可以降低漏检风险，尤其适用于海产品、水样、养殖环境样品等背景菌复杂的样品。

六、常见弧菌在选择性平板上的特征汇总

由于原始资料中部分培养基列名存在识别缺失，上表对无法确认名称的平板未作绝对化描述。实际使用时，应结合检测标准、培养基说明书和质控菌株结果进行判读。

七、为什么不能只凭菌落颜色鉴定弧菌？

弧菌属内许多菌种在选择性培养基上的表现相近。以 TCBS 为例，霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌都可能形成黄色菌落；创伤弧菌和副溶血弧菌都可能形成绿色菌落。如果只根据颜色判断，很容易发生误判。

此外，部分非弧菌也可能在 TCBS 上生长并形成类似菌落，尤其是在样品背景复杂或培养条件偏离时。某些弧菌菌株也可能出现颜色不典型、生长较弱或菌落较小的情况。因此，选择性平板的作用是“筛选可疑菌落”，而不是“最终鉴定菌种”。

规范流程通常包括：选择性增菌、选择性平板分离、挑取可疑菌落、纯化、氧化酶试验、盐耐受性试验、生化鉴定、血清学或分子检测。只有多项结果一致，才能做出较可靠判断。

八、培养基质量对菌落特征的影响

选择性琼脂的质量会明显影响弧菌菌落特征。TCBS 中胆盐、柠檬酸盐、硫代硫酸盐、蔗糖、指示剂和 pH 的平衡非常关键。如果选择性过强，目标弧菌可能生长变弱；如果选择性不足，杂菌可能大量生长，影响可疑菌落挑取。如果 pH 或指示剂状态异常，黄色和绿色反应也可能不清晰。

因此，弧菌选择性培养基在使用前应进行外观检查和质控验证。质控菌株应表现出预期生长和典型菌落颜色；阴性或受抑制菌株应受到适当抑制。平板储存时间过长、表面失水、冷凝水过多或颜色异常时，不建议用于正式检测。

九、小结

常见弧菌在选择性琼脂平板上的菌落特征具有重要初筛价值。TCBS 平板是弧菌分离中最常用的选择性培养基，副溶血弧菌和创伤弧菌多表现为绿色菌落，霍乱弧菌、溶藻弧菌和河弧菌多表现为黄色菌落。弧菌显色培养基可用于部分弧菌的辅助分离，但对河弧菌等菌种未必适用。4 号琼脂可作为霍乱弧菌等目标菌的选择性分离参考平板。

实际检测中，应从选择性平板上挑取 3～5 个典型或可疑菌落进行后续确认。菌落颜色、形态和质地只能作为初筛依据，最终鉴定仍需结合生化、血清学或分子生物学方法。对于弧菌检测而言，正确选择培养基、准确观察菌落特征、规范挑取可疑菌落，是提高检出率和降低误判风险的关键。