金黄色葡萄球菌增菌和分离培养：从选择性增菌到可疑菌落确认

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是食品微生物检验中常见的食源性致病菌之一，可污染乳制品、肉制品、糕点、即食食品以及食品加工环境。该菌具有较强的耐盐性，部分菌株可产生肠毒素，引起食物中毒。因此，在食品检验中，金黄色葡萄球菌的增菌、分离和确认是非常重要的环节。

金黄色葡萄球菌的检验通常包括样品处理、选择性增菌、选择性分离、可疑菌落观察、革兰氏染色镜检和血浆凝固酶试验等步骤。本文主要围绕增菌和分离培养进行解读，帮助理解7.5%氯化钠肉汤、10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、Baird-Parker平板、血平板和显色培养基在检验流程中的作用。

一、为什么金黄色葡萄球菌检验要进行选择性增菌？

食品样品中微生物种类复杂，金黄色葡萄球菌可能数量较低，也可能受到冷藏、干燥、加热、盐分或加工过程影响而处于损伤状态。直接分离时，目标菌容易被背景菌掩盖。因此，定性检验中通常先进行选择性增菌，使目标菌恢复并增殖，再转接至分离平板。

金黄色葡萄球菌具有较强耐盐性，能够在较高氯化钠浓度下生长，而许多竞争菌会受到抑制。利用这一特性，7.5%氯化钠肉汤常用于选择性增菌。若样品污染严重，背景菌较多，也可使用10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤提高选择性。

增菌培养通常在36 ℃±1 ℃条件下进行18 h～24 h。培养后若肉汤出现混浊，提示有细菌生长，但不能直接判定为金黄色葡萄球菌阳性，仍需进一步分离和确认。

二、增菌液为什么不能直接作为最终结果？

增菌液混浊只说明培养基中有微生物生长，并不等于目标菌存在。由于耐盐葡萄球菌、微球菌以及部分耐盐杂菌也可能在高盐培养基中生长，因此必须将增菌培养物转接到选择性分离平板上，观察可疑菌落形态，再进行鉴定。

如果仅凭增菌液混浊判断阳性，容易造成假阳性；如果增菌液不明显混浊，也不能完全排除低水平目标菌，尤其是在样品基质复杂或菌株受损时，应按标准流程完成后续分离培养。

三、分离培养：Baird-Parker平板、血平板和显色培养基

增菌后，应将培养物分别划线接种至Baird-Parker平板和血平板，也可使用金黄色葡萄球菌显色培养基作为补充。不同培养基的作用不同：Baird-Parker平板用于选择性分离和初步鉴别；血平板用于观察菌落形态及溶血特征；显色培养基可提高可疑菌落筛选效率，但应按产品说明和标准要求使用。

在实际操作中，Baird-Parker平板和血平板相互补充。Baird-Parker平板选择性和鉴别性较强，有利于从复杂背景中筛选可疑菌落；血平板则能更直观观察菌落大小、色素和溶血表现，有助于后续挑取典型菌落。

四、Baird-Parker平板上典型菌落如何识别？

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上常形成直径约2 mm～3 mm的菌落，颜色由灰色至黑色，边缘较淡，菌落周围可见混浊带，其外侧常出现透明圈。用接种针轻触菌落时，常呈类似奶油状至树胶样的质地。

这些特征与培养基中的选择性和鉴别成分有关。金黄色葡萄球菌可还原亚碲酸盐，使菌落呈灰黑至黑色；其卵磷脂酶或脂肪酶相关反应可导致菌落周围出现混浊带和透明圈。因此，典型菌落通常具有“黑色菌落、淡色边缘、混浊带、透明圈”组合特征。

需要注意的是，典型菌落并不等于最终确认。部分非目标菌也可能形成类似黑色菌落；相反，长期冷冻、干燥或受损食品中分离的金黄色葡萄球菌，菌落黑色可能较淡，外观也可能较粗糙、干燥。因此，应挑取典型及可疑菌落进行后续确认。

五、非典型菌落也需要关注

在Baird-Parker平板上，偶尔可见类似金黄色葡萄球菌的黑色或灰黑色菌落，但周围没有典型混浊带和透明圈。这类菌落可能为非脂肪分解的类似菌落，也可能是反应较弱或受损的金黄色葡萄球菌。对于食品样品尤其是冷冻、干燥或加工较强的样品，不宜只挑取最典型菌落，而应根据标准要求挑取多个可疑菌落进行确认。

这也是金黄色葡萄球菌检验中常见的质量控制难点：平板形态可以帮助筛选，但不能替代血浆凝固酶试验和其他鉴定试验。

六、血平板上的菌落特征

金黄色葡萄球菌在血平板上通常形成较大、圆形、光滑、凸起、湿润的菌落，常呈金黄色，但也可能为白色或浅色。部分菌株周围可见完全透明的溶血圈。

血平板上的“金黄色”和“溶血”均是重要参考，但也存在变异。有些金黄色葡萄球菌色素不明显，有些菌株溶血表现较弱；而其他葡萄球菌也可能产生一定溶血。因此，血平板结果应与Baird-Parker平板形态、革兰氏染色、触酶试验、血浆凝固酶试验等综合判断。

七、显色培养基的作用和限制

金黄色葡萄球菌显色培养基可通过特定底物反应使可疑菌落呈现特征颜色，有助于从复杂背景菌中快速筛选目标菌。它的优点是观察直观、筛选效率较高，适合样品背景菌较多或需要快速挑取可疑菌落的场景。

但显色培养基的颜色判定依赖产品配方，不同厂家显色原理和菌落颜色可能不同，因此必须严格按说明书判读，并配套质控菌株验证。显色结果通常只能作为筛选依据，不能单独代替标准确认试验。

八、后续确认：革兰氏染色和血浆凝固酶试验

从Baird-Parker平板、血平板或显色培养基上挑取可疑菌落后，应进行革兰氏染色镜检和血浆凝固酶试验。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，显微镜下常呈葡萄串状排列。血浆凝固酶试验阳性是鉴定金黄色葡萄球菌的重要依据之一。

若菌落形态典型但凝固酶阴性，应谨慎判断，必要时重复纯化和复核；若菌落形态不典型但凝固酶阳性，也应结合标准流程进一步确认。

九、增菌和分离过程中的常见问题

十、培养基质量控制要点

金黄色葡萄球菌检验对培养基质量要求较高。7.5%氯化钠肉汤和10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤应具备适度选择性，既能抑制部分背景菌，又不能过度抑制目标菌恢复。Baird-Parker平板应保证亚碲酸盐、卵黄乳液等添加剂质量稳定，使典型菌落黑色、混浊带和透明圈清晰。血平板应保证血液质量、无菌性和溶血表现稳定。

对于培养基生产和使用实验室，应使用合适的阳性和阴性质控菌株验证每批培养基。只有在促生长能力、选择性和鉴别反应均符合要求时，培养基才适合用于正式检验。

小结

金黄色葡萄球菌增菌和分离培养的核心，是利用其耐盐性进行选择性增菌，再通过Baird-Parker平板、血平板或显色培养基筛选可疑菌落。7.5%氯化钠肉汤和10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤用于增菌；Baird-Parker平板上典型菌落常呈灰色至黑色，周围有混浊带和透明圈；血平板上菌落常较大、圆形、光滑、湿润，可呈金黄色并伴有溶血。

需要强调的是，菌落形态只能作为初筛依据。最终确认应结合革兰氏染色镜检、血浆凝固酶试验及必要的进一步鉴定。对于食品检验实验室而言，规范的增菌条件、合格的选择性平板、合理挑取可疑菌落和严格质控，是保证金黄色葡萄球菌检验结果可靠的关键。